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背景:肝细胞癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,在我国所有癌症的死亡率中居第2位,高于全球水平,具有高发病率和高死亡率的特点。尽管传统的肝细胞癌治疗方法有一定进步,但仍缺乏靶向治疗药物,也未能有效阻止病情进程。未分化的巨噬细胞（M0）可根据不同内环境极化为经典活化型（M1）或替代性活化型（M2）两种表型,前者能够促进炎症并杀灭肿瘤细胞、微生物,后者具有抑制炎症、促进肿瘤生长等作用,两种类型巨噬细胞在肿瘤的发生发展中均具有重要作用。TRIM家族蛋白的改变与肿瘤发生、病毒感染及免疫紊乱等过程息息相关。其中,TRIM65能促进多种肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭过程,但关于TRIM65是否通过调控巨噬细胞来促进肝细胞癌的进展目前还尚未研究。方法:1、基于TCGA数据库,对TRIM65在不同肿瘤的癌组织和非癌组织中的表达水平进行差异分析;用生存分析评价TRIM65表达对肿瘤患者预后的影响;对TRIM65表达水平与多种临床病理特征进行卡方分析;对表达谱数据进行预处理后开展CIBERSORT免疫浸润分析,以此评估各类免疫细胞的表达情况;2、基于GEO数据库,对纳入排除标准筛选出的肝癌数据集进行Meta分析,验证TRIM65表达水平在肝癌组织和非肝癌组织中的区别;3、基于DepMap门户网站来分析敲低TRIM65基因对各种细胞系的影响;根据HPA网站的细胞图谱分析TRIM65的蛋白质表达情况;4、肝癌细胞系实验:用qRT-PCR实验来衡量6种肝癌细胞系（MHCC97L、SK-hep、HepG2、Hep3B、Huh7和SMMC-7721）中TRIM65的表达水平;筛选合适的细胞系进行TRIM65敲低,并通过Ed U实验评价TRIM65敲低对细胞增值的影响;5、动物模型饲养:根据qPCR结果将小鼠分为WT组和TRIM65敲除组,每组6只,相同条件下养至同一时间点;6、巨噬细胞实验:取WT组和TRIM65敲除组的小鼠腹腔巨噬细胞体外稳定,用qPCR实验来验证敲除TRIM65的效率;培养2天后,分别加入SF培养基和Hepa1-6细胞的培养上清（条件培养基）;分析TRIM65敲除对巨噬细胞极化（M1/M2）和迁移的影响。结果:1、差异分析的结果显示,TRIM65在多种肿瘤的癌组织中高表达,但仅在LIHC中这种差异具有统计学意义;在GEO数据库中,TRIM65的表达水平在HCC患者中显著高表达;2、生存分析的结果显示,在多种肿瘤中TRIM65的高表达是肿瘤患者的总生存和无病生存时间的危害因素,但仅在LIHC中总生存和无病生存趋势同时具有统计学意义;临床病理分析结果显示,TRIM65过表达与组织学分级（P=4.95e-07）和TNM分期（P=0.0021）密切相关;3、在DepMap数据库中,我们发现TRIM65基因敲低可抑制多种癌症细胞系的生长;在HPA数据库中,TRIM65蛋白在HCC组织中的表达相对较高,而在非癌样本中的表达相对较低;TRIM65主要在红细胞和免疫细胞中表达,而肝细胞的TRIM65表达水平最低;4、TRIM65在HepG2细胞系中的表达相对较高,而在SMMC7721细胞系的表达水平较其他细胞系低;在HepG2细胞系中,sh TRIM65-1的敲除效率最高;Ed U细胞增殖实验表明敲低TRIM65可以抑制HepG2、SMMC7721细胞的增殖;5、免疫浸润分析结果提示,TRIM65表达水平高的HCC组织通常含有较高比例的调节性T细胞（Tregs）、巨噬细胞M0、滤泡辅助性T细胞、巨噬细胞M2、活化的NK细胞、记忆性B细胞、巨噬细胞M1、CD8+T细胞和CD4+记忆激活T细胞（P＜0.05）。HCC中的TRIM65表达水平与巨噬细胞M0（R=0.318,P=1.5E-09）、M1（R=0.12,P=2.55E-02）以及M2（R=0.223,P=2.94E-05）的浸润水平呈正相关;6、qRT-PCR实验结果显示TRIM65-/-组无TRIM65表达,与WT野生型小鼠组具有明显的统计学差异;在Hepa1-6条件培养基的刺激下,TRIM65-/-巨噬细胞中的M2标志物IL-10（P＜0.001）和Arg1（P＜0.05）显著低于WT组,而TRIM65-/-巨噬细胞中的M1巨噬细胞标志物TNFα（P＜0.05）、IL-1β（P＜0.01）和IL-6（P＜0.001）显著高于WT组。结论:TRIM65在HCC中高表达,且高表达与HCC患者的不良预后、组织学分级及TNM分期密切相关。TRIM65表达与巨噬细胞M0、M1以及M2的浸润情况显著相关。细胞实验表明,敲低TRIM65可以抑制肝癌细胞的增殖能力,敲除TRIM65可以使M1型巨噬细胞增加、M2型巨噬细胞减少,还能促进巨噬细胞的迁移能力。综上,本研究认为TRIM65或许可作为生物标记物,为HCC早期治疗、患者康复等过程提供新的策略,从而改善患者的预后。