【摘 要】
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细胞核与细胞质的关系是生物学的基本问题,核移植和原核置换是研究核质关系的重要方法。迄今为止,哺乳动物的原核置换研究主要在小鼠上进行。按照供体细胞的不同,哺乳动物核
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细胞核与细胞质的关系是生物学的基本问题,核移植和原核置换是研究核质关系的重要方法。迄今为止,哺乳动物的原核置换研究主要在小鼠上进行。按照供体细胞的不同,哺乳动物核移植研究可分为两种:胚胎细胞核移植和体细胞核移植。小鼠是重要的发育模式动物,在已有的小鼠核移植报道中,胚胎细胞核移植和体细胞核移植分别采用不同的研究策略。胚胎细胞核移植一般采用融合的方法,而体细胞核移植一般采用胞质内直接注射的方法进行。准确去除受体卵母细胞的细胞核是核移植研究的关键技术之一,在装备有Normarski或Hoffmann光学镜头的倒置显微镜下可以准确去除小鼠MⅡ期卵母细胞的细胞核。研究表明用适当浓度的蔗糖处理小鼠卵母细胞能准确去除细胞核。本论文的主要目的是改进和修改小鼠核移植和原核置换的实验程序,试图建立新的小鼠核移植和原核置换的可行方法。本论文的主要创新点:1)以小鼠致密桑椹胚卵裂球为供体,研究了不同蔗糖浓度处理卵母细胞对核移植操作时间和重构胚体外发育的影响,进一步证明了蔗糖处理去核是一种安全的方法,并且蔗糖处理的去核卵胞质能支持胚胎细胞核移植重构胚发育到期。2)以小鼠耳成纤维细胞为供体,研究了供体细胞传代次数和电融合次数对核移植重构胚的体外发育的影响,证明了电融合对重构胚发育的不利影响,并且进一步证明蔗糖处理的去核卵胞质能支持体细胞核移植重构胚发育到期。3)通过把体外受精和孤雌激活相结合的方法,克服了难以区别雌雄原核的困难,获得了小鼠不同品系之间原核置换的小鼠,并且证明了小鼠雌雄原核在后代毛色决定方面具有不同的作用。
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