苹果花成分分析及功效关联性研究

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苹果花为蔷薇科苹果属植物苹果(Malus pumila Mill)的干燥花。苹果花主要含有根皮苷、根皮素、槲皮素及山奈素等黄酮类化合物,具有抑制黑斑的产生,还可以补血护肝、养颜美容和改善消化等作用。本论文对敲出技术进行了综述,通过文献追踪概述了敲出技术的优缺点。本论文首先采用谱效关系和成分敲出方法,对苹果花中活性成分进行体外抗氧化及酪氨酸酶活性研究,筛选出具有抗氧化或酪氨酸酶活性的化合物。利用高分辨质谱鉴定出7个化合物,P34、P35、P38、P39、P44、P45和P49分别是根皮苷、金丝桃苷、山奈素、紫云英苷、阿福豆苷、槲皮素和山奈酚。对不同成分进行体外抗氧化及酪氨酸酶活性测定,结果表明当各样品的浓度为相当于原药材1 g/mL时,P15、P29、P32、P35(金丝桃苷)、P36、P37、P38(山奈素)、P39(紫云英苷)、P42、P44(阿福豆苷)、P48和P49(山奈酚)具有清除DPPH自由基作用;P7、P15、P29、P32、P34(根皮苷)、P36、P37、P40、P41、P42和P45(槲皮素)具有清除ABTS自由基作用。P29、P32、P36、P37、P39、P40、P41、P42、P45(槲皮素)、P48和P49(山奈酚)对酪氨酸酶均有激活作用;P7、P15、P34(根皮苷)、P35(金丝桃苷)、P38(山奈素)和P44(阿福豆苷)对酪氨酸酶均有抑制作用。采用偏最小二乘法建立不同批次苹果花的谱-效关系,结果表明P35(金丝桃苷)和P38(山奈素)对DPPH自由基清除活性与谱-效关系结果一致;P34(根皮苷)和P45(槲皮素)对ABTS自由基清除活性与谱-效关系结果一致;P45(槲皮素)对酪氨酸酶激活作用与谱-效关系结果一致;P34(根皮苷)、P35(金丝桃苷)和P38(山奈素)对酪氨酸酶抑制作用与谱-效关系结果一致。然后利用高效液相法对苹果花开放时期的黄酮类成分进行动态变化研究,结果表明在出现花蕾后的第三天(2018年3月28日)采收的苹果花中根皮苷、紫云英苷和阿福豆苷的总含量达到最高(176.74 mg/g),之后总含量呈现下降趋势;其中紫云英苷和阿福豆苷的含量在出现花蕾后的第7天(2018年4月1日)之后呈下降趋势,而根皮苷在出现花蕾后的第8天(2018年4月2日)后又呈上升趋势。最后使用离子液体辅助萃取苹果花中的黄酮类成分,选择[BMIM]Br的甲醇溶液为萃取剂,采用响应面试验设计得到最佳提取工艺:粉碎目数为70目,萃取剂浓度为0.52 mol/L,超声时间为60 min,固液比为1:100,离心转速为7000 r/min,结果表明在最佳条件下根皮苷、紫云英苷和阿福豆苷的总含量为181.03 mg/g,与不加离子液体相比,其总萃取率提高了25.4%。
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