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研究目的: 非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)患病率以及致死率都在不断增高,已经成为世界第二大肝病,所以对人类健康产生了严重的危害。目前临床治疗仍缺乏特效药,但大量研究表明,脂质代谢紊乱和肝脏PPARα表达与NAFLD的发生发展关系密切。本实验通过8周游泳训练结合补充白藜芦醇以及两者联合干预,观察对高脂高胆固醇饮食法诱导的NAFLD大鼠模型肝组织病理切片,血清以及肝脏脂质过氧化程度,抗氧化相关指标,PPARα mRNA和蛋白的表达水平。从而探讨不同干预手段对脂质代谢改善程度,氧化与抗氧化系统的调控以及PPARα表达的作用,为运动疗法和补充白藜芦醇对NAFLD的转归提供一定的理论依据和数据支持。 实验方法: SPF级雄性SD大鼠60只,体重280±10g,普通饲料适应性喂养1周后随机分为5组,每组12只,分别为:正常对照组(C组)、模型对照组(HC组)、模型给药组(HR组)、模型运动组(HE组)、模型给药运动组(HRE组)。除C组喂食普通饲料外,其余各组喂食高脂高胆固醇饲料,共计16周;9周时,HR组开始给予45ml/(kg·bw·d)的白藜芦醇灌胃,HE组进行1h/d游泳训练,HRE组进行游泳训练,同时给予45ml/(kg·bw·d)的白藜芦醇灌胃。 实验结束后,大鼠禁食12h。采取腹腔注射10%水合氯醛麻醉腹主动脉取血,制备血清,放入-80℃液氮保存,待测血清生化指标。打开胸腔取肝脏,剥离称重,分组标记,切取肝中叶同一部位组织,一半置于甲醛溶液中固定,待做组织学病理学切片,一半放于EP管在液氮中保存,待测。 实验结果: 1.SD大鼠体重变化:实验1-8周,模型各组大鼠同C组相比较,均呈非常显著性升高变化(P<0.01)。实验9周时,HR组、HRE组同HC组相比较,呈降低变化,差异具有非常显著性(P<0.01);12周时HC组同各组比较,均表现为呈现非常显著性升高现象(P<0.01);实验14周时,HRE组同HR组比较呈现非常显著性降低变化(P<0.01),同HE组比较,呈现显著性降低变化(P<0.05)。 2.光镜下观察肝组织病理学切片:C组肝细胞中肝小叶构造较完整,轮廓清晰明确,放射状肝条索排列较整齐有序,也没有呈现出弥漫性脂肪细胞及炎症细胞浸润现象;HC组脂肪变肝细胞体积变大,胞内呈现数量不等,大小不一的圆形脂质空泡,并附有细胞融合现象,位于中心位置的细胞核被脂质空泡挤压至胞膜,并伴有汇管区炎症、点状坏死现象。HR组和HE组脂质空泡数量和体积较HC组有所减少,肝索放射状排列较有恢复,炎症和坏死现象减少; HRE组中央静脉清晰可见,肝小叶结构出现,肝索放射状排列较好,脂肪空泡基本上消失,未见炎症细胞浸润和肝细胞坏死。 3.HC组同C组相比较,血清中HDL-C降低变化,TG、TC、LDL-C、FFA均表现为升高变化,其中,TG和FFA差异具有非常显著性(P<0.01);肝重、肝指数以及肝组织匀浆中TG、TC含量均升高且具有非常显著性差异(P<0.01)。HR组和HE组、HRE组同HC组相比较,血清LDL-C有升高变化,TG、FFA均有非常显著性降低(P<0.01),TC均有下降变化(HE除外),肝重、肝指数、肝组织匀浆中TG、TC均表现为降低变化。 4.HC组同C组相比较,肝组织中MDA含量表现为上升,血清中ALT含量呈升高变化以及GSH含量下降,且三者都呈现非常显著性差异(P<0.01),肝组织中SOD活性无统计学意义。HR组、HE组和HRE组同HC组相比较,血清ALT和肝组织MDA含量呈下降变化,且表现为非常显著性差异(P<0.01)。 5.同C组比较,模型各组大鼠肝组织PPARα RNA Real-Time PCR表达量均表现为升高变化,其中HC组、HR组非常显著性升高(P<0.01);同HC组相比较,HE组、HRE组呈非常显著性下降变化(P<0.01)。各组肝脏中PPARα蛋白表达同HC组相比较,均呈降低变化,且差异具有非常显著性(P<0.01);经过8周联合干预使其趋近于正常。 结论: 1.长期高脂高胆固醇饮食可引起体重、肝重以及肝指数的异常增加,促使NAFLD的发生、发展。提示,运动具有燃脂降体重的效果,白藜芦醇呈现热卡限制作用,两者联合干预对调节机体能量代谢失衡,减缓体重增长速率效果最好。 2.8周干预实验后肝细胞体积增大,脂肪滴融合,胞核被挤压现象均有不同程度改善,其中,联合干预方式效果最佳。 3.8周干预实验使血脂和肝脂代谢指标趋于正常,其中,联合干预方式效果最优。 4.8周干预实验使血清ALT降低和GSH升高,肝组织中MDA降低。提示,游泳训练和补充白藜芦醇单一或是联合干预方式均可以减缓肝细胞受损程度,提高抗氧化能力。其中,补充白藜芦醇单一干预方式效果最优。 5.8周干预实验对肝组织中PPARα基因和蛋白表达改善效果良好。提示,游泳训练结合补充白藜芦醇干预方式可以减少肝脏中PPARα基因和蛋白表达,缓解NALFD的发生、发展。