目的2010版药典沉香含测质控标准仅浸出物含量一项,难以科学地评价该常用贵重药材的质量；而沉香有效部位挥发油含量甚低,难以用挥发油含量作为评价该贵重药材质量的指标。为此,作者拟通过现代分析技术与统计学方法的系统应用,找出沉香色酮与挥发油中有效成分之间的关系,探讨建立沉香质量评价体系的科学方法,为沉香质量标准的现代化、规范化以及沉香GAP基地的建设,提供科学依据。方法1取沉香药材粉末,用70%乙醇(固液比为1：10)回流提取,得到浸膏,加水溶解后用环己烷萃取,得环己烷部位浸膏,硅胶(200目)柱层析分离,溶剂法纯化得到目标化合物1；取沉香药材粉末,环己烷提取后,药渣用甲醇回流提取,得到浸膏,硅胶(200目)柱层析多次分离,溶剂法纯化得到目标化合物2,采用高效液相色谱法及薄层色谱法分析其纯度,核磁共振光谱法鉴定两者结构。2参照《中国药典》2010版的外观、理化鉴别、醇溶性浸出物含量测定规定,对沉香样品进行初步评价及鉴别；应用薄层层析法对沉香甲醇提取液和乙醚提取液进行薄层分析,并采用两种不同极性的展开系统展开,观察其薄层行为,建立其TLC指纹图谱。3应用HPLC-PDA法对沉香乙醚提取物进行全波长扫描,确定基线稳定,提供信息量比较丰富的检测波长,以6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮作为参照峰,建立不同批次沉香指纹图谱,获得共有峰信息,并采用《中国药典》“中药指纹图谱相似度评价系统A版”对共有峰信息进行相似度分析,采用SPSS16.0统计分析软进行聚类分析及主成分分析。4应用UPLC法对不同批次沉香中6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮含量进行测定。采用WATERS UPLC色谱系统,ACQUITY BEH Shield RP18色谱柱(2.1mm×100mm,1.7μm)；流动相为乙腈-0.4%磷酸水梯度洗脱；检测波长为234nm;流速0.3ml/min;柱温35℃。5应用磷钨酸钼-硫酸锂显色剂对沉香中色酮类成分进行显色,以5,6,7,8-四羟基-2-[2-(3’-羟基-4’-甲氧基苯)乙基]色酮作为对照品,采用紫外可见光分光光度法测定沉香总色酮含量。6采用香草醛-冰醋酸-高氯酸比色法,以熊果酸作为对照品,测定沉香总三萜含量。7采用乙醚冷浸法提取不同批次沉香挥发油,采用GC-MS法进行挥发油成分分析。8应用SPSS16.0统计分析软件,对沉香中6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮含量、总色酮含量、总三萜含量、乙醚浸出物含量、苄基丙酮含量、醇溶性浸出物含量进行相关分析,得出各项指标的内在关系。结果1分离得到两个单体化合物,并鉴定为：6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮和5,6,7,8-四羟基-2-[2-(3’-羟基-4,-甲氧基苯)乙基]色酮。2建立沉香两类极性成分的薄层分析方法,并建立薄层指纹图谱,图谱显示斑点清晰,分离度良好,信息量丰富,并初步鉴定出市售两批沉香和所购越南沉香为伪劣产品。3建立了沉香药材的HPLC指纹图谱分析方法,以6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮对照品为参照峰,确立了沉香药材指纹图谱中的12个共有峰。相似度分析结果显示,各批沉香相似度在0.541～0.983之间,差异较大。通过对共有峰相对峰面积进行聚类分析和主成分分析,可将所研究沉香样品分为3类。4建立了测定沉香中6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮含量的UPLC法,本法可在13mmin内完成色谱分析,且色酮色谱峰分离度在1.5以上。其线性范围为0.0074～0.1235μg回归方程为Y+15507229.64952X-20016.04908(r=0.9997),其平均加样回收率为95.6%,RSD=1.89(n=6)。各批沉香6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮含量在0.45-14.53mg·g-1之间,差异显著。5优选出最佳提取方法及显色条件,建立了测定沉香总色酮含量的磷钨酸钼-硫酸锂比色法。色酮测定量在0.00886～0.04430mg范围内与吸光度呈良好线性关系,回归方程为y=4.8488x+0.0290(r=0.9994),其平均加样回收率为95.69%,RSD=2.61%(n=6)。各批沉香总色酮含量在15.93～5.78mg·g-1之间,差异显著。6优选出最佳提取方法以及显色条件,建立了测定沉香总三萜含量的香草醛-冰醋酸-高氯酸比色法。熊果酸测定量在0.0212～0.1696mg范围内呈良好线性关系,回归方程为A=5.5528X-0.0419(r=0.9993),其平均加样回收率为96.26%,RSD=2.87(n=6)。各批沉香总三萜含量在19.46～86.19mg··g-1之间,差异显著。7测得各批沉香样品乙醚浸出物含量,获得了其乙醚浸出物的总离子流图,成功检测到沉香中的活性成分之一苄基丙酮以及特征成分沉香螺醇,还有其他多种倍半萜成分、脂肪酸类成分、芳香族成分。其中各批沉香乙醚浸出物里的共有成分,苄基丙酮和多种色酮类成分,通过百分含量推算得到其在沉香中的含量。8综合统计分析结果显示,乙醚浸出物含量与6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮含量、苄基丙酮含量之间的相关系数分别为0.807、0.864(P<0.01),呈高度正相关关系,与总色酮含量之间的相关系数为0.673(P<0.05),呈中度正相关关系。乙醚浸出物含量与另外3项指标6,7-二二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮、总色酮含量、苄基丙酮含量之间的相关系数均比醇溶性浸出物含量与此3项指标之间的相关系数高。结论1本文从沉香药材中提取分离得到两种色酮类物质沉香的主要化学成分包括挥发油、色酮类、三萜类、脂肪酸类等物质,其中色酮类物质丰富多样。本文从沉香中分离得到两种色酮类物质,分别是6,7-二二甲氧基-2-(2.苯乙基)色酮和5,6,7,8-四羟基-2-[2-(3’-羟基-4’-甲氧基苯)乙基]色酮。沉香的色酮类物质具有潜在开发利用价值,值得进一步深入研究。2初步建立了沉香的质量评价体系本文采用现代分析技术,建立了沉香TLC、HPLC指纹图谱、色酮单体及总色酮含量测定、乙醚浸渍GC-MS分析等方法,可用于沉香质量评价体系的建立,为沉香质量标准的制定和GAP基地的建设提供了科学依据和技术参考。3探索了沉香中多项指标含量之间的相关性本文采用相关分析法对沉香中多项指标含量进行相关分析,发现乙醚浸出物含量与6,7-二二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮含量、挥发油主成分苄基丙酮含量有高度正相关性关系,与总色酮含量有中度正相关关系。提示以乙醚浸出物含量的变化就能反映出6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮含量、苄基丙酮含量、总色酮含量三项指标的变化趋势,为大大简化沉香质量评价方法提供可能。乙醚浸出物含量与另外3项指标6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮、总色酮含量、苄基丙酮含量之间的相关系数均比醇溶性浸出物含量与此3项指标之间的相关系数高,结果提示,乙醚浸出物含量比药典规定的醇溶性浸出物含量更能反映出沉香质量优劣。