生物体在正常的新陈代谢中会不断产生自由基,而自由基释放过量便会导致自由基的积累,从而使自身的抗氧化体系不能够完全抵御自由基对机体的损伤。乳酸菌胞外多糖(EPS)是一种具有生物活性的大分子物质。研究证明乳酸菌胞外多糖具有明显的抗氧化活性。本实验主要通过从8株产胞外多糖的乳杆菌中筛选出一株产高抗氧化活性多糖的菌株,对其抗氧化性进行评价并初步分析其结构。首先从Lactobacillus casei Y3,L.casei Y4,L.casei Y16,Lactobacillus planterum Y41,L.planterum Y42,L.planterum Y44,L.casei Y35,Lactobacillus rhamnosus GG这8株菌株的MRS培养液中采用醇沉-水提法提取EPS,通过测定EPS的DPPH自由基清除率、ABTS·+清除率、羟自由基清除率、铁离子还原力(FRAP)、氧自由基吸收能力(ORAC)及对ABAP氧化损伤HT-29细胞的保护作用评价8株菌所产EPS抗氧化性,通过主成分分析法得出Y42菌株EPS抗氧化活性的综合得分最高即Y42菌株产生的胞外多糖的抗氧化性最强,因此选取Y42菌株所产EPS进行后续实验。将浓度为500μg/mL、250μg/mL、100μg/mL、50μg/mL的Y42菌株的EPS作用于ABAP氧化损伤的HT-29细胞,结果显示随着胞外多糖浓度的降低,氧化损伤HT-29细胞的存活率逐渐降低,但都显著高于氧化损伤组(p<0.05);并发现Y42菌株EPS显著上调HT-29细胞过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)的表达量(p<0.05);多糖预处理后细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性也显著高于氧化组(p<0.05)。最后采用DEAE-Sepharose Fast Flow离子柱对Y42粗多糖进行分离纯化,得到了两个组分,分别为42-1中性多糖以及42-2酸性多糖。采用高效液相色谱测定Y42粗多糖的单糖组成为甘露糖、葡萄糖醛酸、氨基葡萄糖、氨基半乳糖、半乳糖,其摩尔比为11.30:3.51:10.64:7.53:7.19。对Y42粗多糖进行红外光谱扫描,结果表明该糖具有典型的特征吸收峰,属于吡喃糖环的骨架模式。根据实验结果推测,L.planterum Y42胞外多糖可能是通过清除氧自由基、以及促进HT-29细胞抗氧化酶系的表达起到保护HT-29细胞免受ABAP自由基损伤。