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单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)是人类重要的致病病毒,能引起口唇疱疹、生殖器疱疹、脑炎、内脏器官感染,并与宫颈癌和唇癌有关。人们虽然致力于研制疫苗用于HSV感染的预防,但因HSV的基因为双链DNA,易与宿主DNA发生整合作用,或形成潜伏状态,从而限制了病毒疫苗的发展与应用。筛选有效的抗病毒药物是当务之急。到目前为止,已发现多种化学药物有抗疱疹病毒作用,但往往因为毒性太大或耐药性的产生而限制了它们的临床应用。而祖国的中草药资源非常丰富,有化学药物无法比拟的优点。甘草是最常见的中草药,现代研究证实,甘草酸(glycyrrhizic acid,GA)是甘草中最重要的有效成分之一,抗病毒作用是甘草酸类的主要药理作刚之一。甘草酸的衍生物---甘草甜素(GL)片已正式在临床上用于治疗乙肝病人。日本学者研究证实,甘草酸有直接的抗HBV作用及对肝功能障碍的改善作用。1986年日本学者首次报导了甘草甜素抗爱滋病病毒(HIV)的作用。甘草酸对其他病毒的抑制作用也有一些报道,Utsunomiya等认为甘草甜素的抗流感病毒作用与甘草甜素诱导体内T淋巴细胞产生γ干扰素有关。干扰 浙江人学匹学院颀I:论义I!“学敝体外抗抱疹病亩作用 素(IF)是一类重要的细胞素,它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、 抗细胞分裂、免疫调节等多种生物学活性。2’,5’寡腺昔酸合成酶Q’,5’ OllgO&dCllylstC SyflthCt8SC,2-SAS)是干扰素抗病毒、抗细胞增殖过程中 的关键酶,该酶可作为一项生化指标用于评价机体 IFN系统的抗病毒作 D 用。 卜一·本实验旨在研究甘草酸抗病毒(单纯抱疹病毒)作用,并进一步了 解甘草酸抗病毒的机理所在。通过此研究有助于明确甘草酸对单纯炮疹 病毒引起的疾病的治疗作用,通过检测甘草酸用药前后2’,r寡腺昔酸 合成酶的变化了解甘草酸抗病毒机理,使甘草酸广泛用于病毒性疾病的 治疗。 对象和方法: 攻击病毒为 HSV,而 HepZ细胞为靶细胞,药物一甘草酸是 SIGMA公司产品,为白色粉木状的甘草酸单铰输,分子量为 82.4, HPLC测定纯度为乃%。先测定病毒毒力;再进行药物细胞毒性实验;药 物抗病毒实验,包括:甘草酸对病毒所致的细胞病变的抑制作用、甘草 酸对病毒侵入细胞的阻断作用、甘草酸对病毒的直接抑制作用、相同浓 度甘草酸对不同浓度病毒的抗病毒作用;给小鼠注射不同浓度甘草酸, 检测注射diJ与注射后 6小时、互二小时、24 /h时、48小时 2’,5’寡腺昔酸 合成酶的变化。 结果: l、药物细胞毒性实验 r 甘草酸对HepZ细胞的最大无毒浓度为*sing/ml,而且使用无毒 浓度甘草酸的细胞生长得比对照组更好,维持时间更长,说明甘草酸有 促进细胞生长的作用。 2、药物抗病。8实验: 2 浙江人学医学院灿卜论义 仕竿胶休外抗抱疹刑详作用 2* 甘草酸对病毒所致的细胞病变的抑制作用 将甘草酸连续 2倍稀释做抗病毒实验表明在 0.5到2smg/ml间, 有明显的细胞病变抑制作用,说明甘草酸对HSVI的复制有抑制作用。 N Reed-Muench法计算细胞病变抑制率,ED扣为 0.574mg/ml。 2.二 甘草酸对病毒侵入细胞的阻断作用 用 25、l*、0.5、0.25、0.128、0.064mg/ml白甘草酸对病毒感染 的预防作用表明,2.5、1.0和 0.sing/ml浓度组可延缓 HSV引起的细 胞病变,与病毒对照组有明显差异;而V草酸浓度(0.25 mg/ml则无明 显阻断病毒侵入细胞的作用。提示大剂量的甘草酸才有预防HSVI 感 染的作用。& Reed-Muench ik计算细胞病变抑制率,ED扣为 1.89mg/ml。 2.3 对病毒的直接抑制作用 将以上6个浓度的甘草酸与HSVI悬液混合、经37℃作用6、12 小时,检测甘草酸对HSVI感染的阻断作用。结果表明,二者对HSVI 感染无明显减弱,细胞病变程度与病毒对照组无显著差异。 2.4 相同浓度甘草酸对不同浓度病毒的抗病毒作用 选用 lffig/ffil甘草酸进行对 100TCID50f00 TCIDS卜 1000 TCIDS。的 HSVI抗病毒研究,包括以上三过程。结