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本实验的目的在于评估冠心病和糖尿病患者脂蛋白中SAA含量改变对HDL诱导巨噬细胞胆固醇外流、抗LDL氧化能力,以及LDL氧化特性的影响。
方法:
1.收集单纯糖尿病患者、糖尿病合并冠心病患者以及单纯冠心病患者血浆样本;
2.通过密度梯度离心分离脂蛋白;
3.用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测各种脂蛋白的SAA含量;
4.用佛波酯(PMA)诱导THP-1单核细胞系分化为巨噬细胞,用乙酰化LDL(ac-LDL)处理巨噬细胞获得泡沫细胞;
5.泡沫细胞中加入不同患者的HDL,孵育24小时;
6.用酶法结合高效液相色谱法(HPLC)测定细胞内外的游离胆固醇和总胆固醇含量,从而获得巨噬细胞胆固醇外流率;
7.通过检测紫外吸收OD234nm测定脂质氧化程度,评估SAA含量与LDL氧化特性的相关性;
8.通过检测OD234nm测定脂质氧化程度,评估SAA含量与HDL抗LDL氧化保护功能的相关性;
9.应用SPSSV11.0.1软件,采用单因素方差分析和多因素logistic回归分析处理检测结果,进行相关性分析。
结果:
1.入选患者各组间基础人口统计学特点、临床生化指标和既往病史无明显统计学差异(p>0.05);
2.HDL中SAA的量明显高于LDL和VLDL+CM(p=0.002);
3.HDL中SAA含量在冠心病合并糖尿病和单纯冠心病患者中较高,单纯糖尿病患者中较低(p=0.033);糖尿病患者VLDL+CM中SAA含量均较非糖尿病患者高(p=0.013),LDL-SAA存在升高趋势(p=0.091);
4.糖尿病人群的总胆固醇外流率和游离胆固醇外流率均明显下降(p值分别为0.016和0.021);高HDL.SAA组的总胆固醇外流率高于低HDL-SAA组(p=0.036);
5.糖尿病患者与非糖尿病患者相比,LDL氧化OD<,max>值较高(p=0.015),但氧化延滞时间也延长(p=0.028);
6.LDL-C是LDL氧化OD<,max>值的正相关独立影响因素(偏回归系数为1.563,wald=5.345,p=0.021);
7.与非冠心病患者相比,应用冠心病患者HDL后LDL氧化OD<,max>值明显较高(P=0.035),氧化延滞时间有下降趋势(p=0.091);
8.高HDL-SAA组的LDL氧化延滞时间明显缩短(p=0.003)。
结论:
1.SAA主要存在于HDL中;其他脂蛋白中可以有少量分布;
2.冠心病患者HDL中SAA含量明显升高;与非糖尿病患者相比,糖尿病患者的LDL和VLDL+CM更容易结合SAA;
3.糖尿病患者HDL促进细胞内胆固醇外流的能力下降;HDL中SAA含量的升高可以促进细胞内胆固醇外流;
4.糖尿病患者的LDL易被氧化;LDL-C与LDL的氧化正相关;
5.冠心病患者的HDL抑制LDL氧化的能力下降;HDL中SAA含量的升高伴随着HDL抗氧化能力的下降。