【摘 要】
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本源性乳酸菌具有更好的生物相容性和肠道定植能力,本研究旨在设计一种能从复杂基质中高效分离乳酸菌的专用培养基,用于分离猪源性肠道乳酸菌,建立乳酸菌库,为微生态制剂的制备提供优良菌株,改善猪肠道微生态环境,增强免疫力,为猪无抗养殖寻找替代途径。首先以实验室保藏的G+致病菌、G-致病菌、芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌等为受试菌株,在MRS培养基中添加各种抑菌剂,以杂菌抑制率和乳酸菌菌落形成率为指标,优化乳酸菌
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本源性乳酸菌具有更好的生物相容性和肠道定植能力,本研究旨在设计一种能从复杂基质中高效分离乳酸菌的专用培养基,用于分离猪源性肠道乳酸菌,建立乳酸菌库,为微生态制剂的制备提供优良菌株,改善猪肠道微生态环境,增强免疫力,为猪无抗养殖寻找替代途径。首先以实验室保藏的G+致病菌、G-致病菌、芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌等为受试菌株,在MRS培养基中添加各种抑菌剂,以杂菌抑制率和乳酸菌菌落形成率为指标,优化乳酸菌的选择性分离培养基,以健康猪新鲜粪便为材料,将此选择性培养基用于猪肠道乳酸菌的分离,将分离到的菌株通过16S rDNA序列进行鉴定,并将分离结果同粪便微生物高通量测序结果进行比较,对此乳酸菌选择培养基的分离效果进行评价。结果表明,MRS培养基中添加终浓度为1000 mg/L的山梨酸和64μg/m L的多黏菌素E硫酸盐时,对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、啤酒酵母和酿酒酵母的抑制率达到100%,罗伊氏乳杆菌和嗜酸乳杆菌的菌落形成率达83.425%。用此选择性培养基从3头猪粪便中共分离到82株G+菌(85.416%),经鉴定,其中罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)61株,格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)14株,淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylovorus)6株,乳酸肠球菌(Enterococcus lactis)1株。粪便微生物高通量测序结果表明,乳酸杆菌属(Lactobacillales)占肠道微生物菌群的7%~16%,该属中的优势乳酸菌为Lactobacillus reuteri和Lactobacillus gasseri,分别占肠道微生物总量的0.0903%~0.436%和0.006%~0.142%,高通量测序报告中没有显示Lactobacillus amylovorus和Enterococcus lactis。可见,本研究设计的选择性培养基可从猪粪便中高效准确分离乳酸菌,为不同畜禽来源乳酸菌库建立及自然界其他复杂基质中乳酸菌的分离提供了方法支持。本研究分离鉴定结果和16S rDNA高通量测序结果均表明猪肠道中的优势乳酸菌为Lactobacillus reuteri和Lactobacillus gasseri,该研究结果为猪用微生态制剂的研发提供理论依据和菌株支持。
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