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目的探讨含SH2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)对体外活化肝星状细胞(HSC)细胞周期的影响。方法通过腺病毒反复感染AD293细胞,扩增仅表达绿色荧光蛋白(GFP)的对照空病毒Ad-GFP、携带野生型SHP2(PTPN11)基因并表达GFP的重组腺病毒Ad-SHP2及携带靶向SHP2的RNA干扰序列——短发夹RNA(shRNA)并表达GFP的重组腺病毒Ad-shRNA/SHP2;体外培养人肝星状细胞系LX-2,将重组腺病毒Ad-SHP2、Ad-shRNA/SHP2及对照空病毒Ad-GFP分别转染LX-2细胞;采用流式细胞术检测各组HSC(LX-2细胞)的细胞周期时相,采用Western blot及Realtime PCR技术检测各组HSC的SHP2、Cyclin D1、CDK4、p27kip1表达。实验分组:(1)Control组:腺病毒转染时以DMEM代替腺病毒;(2)Ad-GFP组:转染空病毒Ad-GFP;(3)Ad-shRNA/SHP2组:转染重组腺病毒Ad-shRNA/SHP2;(4)AdSHP2组:转染重组腺病毒Ad-SHP2。结果1通过用腺病毒Ad-GFP、Ad-shRNA/SHP2及Ad-SHP2反复感染AD293细胞,获得实验所需滴度的上述三种腺病毒,并应用上述腺病毒转染体外活化HSC,腺病毒感染HSC 48小时的转染效率均达到80%以上。2收集各组腺病毒感染48小时的活化HSC,应用实时荧光定量PCR及Western blot技术检测各组HSC的SHP2 mRNA及蛋白表达,Ad-SHP2组HSC的SHP2 mRNA及蛋白表达明显高于Control组、Ad-GFP组及Ad-shRNA/SHP2组(P<0.05);而Ad-shRNA/SHP2组HSC的SHP2 mRNA及蛋白表达则明显低于Control组、Ad-GFP组及Ad-SHP2组(P<0.05);但Control组与Ad-GFP组HSC的SHP2 mRNA及蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。3流式细胞术检测各组HSC的细胞周期时相显示:G0/G1期细胞百分比,Ad-SHP2组(43.908%±1.575%)明显低于Control组(52.189%±0.518%)、Ad-GFP组(52.145%±0.808%)及Ad-shRNA/SHP2组(72.933%±1.026%,P<0.05),而Ad-shRNA/SHP2组明显高于Control组、AdGFP组及Ad-SHP2组(P<0.05);S期细胞百分比,Ad-SHP2组(32.068%±1.706%)明显高于Control组(29.490%±1.775%)、Ad-GFP组(29.167%±1.225%)及Ad-shRNA/SHP2组(13.443%±1.769%,P<0.05),而AdshRNA/SHP2组明显低于Control组、Ad-GFP组及Ad-SHP2组(P<0.05);G2/M期细胞百分比,Ad-SHP2组(24.023%±2.326%)明显高于Control组(18.321%±2.008%)、Ad-GFP组(18.688%±1.980%)及Ad-shRNA/SHP2组(13.623%±2.272%,P<0.05),而Ad-shRNA/SHP2组明显低于Control组、AdGFP组及Ad-SHP2组(P<0.05);且Control组与Ad-GFP组各期细胞百分比差异均无统计学意义(P>0.05)。4腺病毒感染HSC 48小时,实时荧光定量PCR及Western blot技术检测各组HSC的Cyclin D1和CDK4的mRNA及蛋白表达,AdSHP2组HSC的Cyclin D1和CDK4的mRNA及蛋白表达显著高于Control组、Ad-GFP组及Ad-shRNA/SHP2组(P<0.05);而Ad-shRNA/SHP2组HSC的Cyclin D1和CDK4的mRNA及蛋白表达则显著低于Control组、Ad-GFP组、AdSHP2组(P<0.05);但Control组与Ad-GFP组HSC的Cyclin D1和CDK4的mRNA及蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。5腺病毒感染HSC 48小时,实时荧光定量PCR及Western blot技术分析各组HSC的p27kip1 mRNA及蛋白表达,Ad-SHP2组HSC的p27kip1 mRNA及蛋白表达显著低于Control组、Ad-GFP组及Ad-shRNA/SHP2组(P<0.05);而Ad-shRNA/SHP2组HSC的p27kip1 mRNA及蛋白表达则显著高于Control组、Ad-GFP组及Ad-SHP2组(P<0.05);但Control组与Ad-GFP组HSC的p27kip1蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论1 SHP2表达变化对体外活化HSC细胞周期有明显影响,即SHP2过表达可促进体外活化HSC细胞周期G1-S期转换,而下调SHP2表达则可显著抑制体外活化HSC细胞周期G1-S期转换,阻滞HSC细胞周期时相于G0/G1期。2 Cyclin D1、CDK4、p27kip1参与了SHP2对体外活化HSC细胞周期的调控,即SHP2过表达可通过上调Cyclin D1、CDK4表达及下调p27kip1表达促进体外活化HSC细胞周期G1-S期转换,而下调SHP2表达则可通过使Cyclin D1、CDK4表达下降及p27kip1表达升高抑制体外活化HSC细胞周期G1-S期转换。图 6 幅;表 13 个;参 106 篇。