家蚕C3HC4型锌指蛋白基因家族的鉴定与分析

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家蚕(Bombyx mori)是一种具有重要经济价值的鳞翅目昆虫。家蚕C3HC4型锌指蛋白是一种重要的转录调控因子,能与核酸特异性结合,且与不同的靶基因序列结合会发挥不同的功能,参与多种不同生理过程。本论文对家蚕C3HC4型锌指蛋白基因家族进行了鉴定和生物信息分析并对其成员Ring finger protein181(RNF181)进行了c DNA克隆、原核表达、蛋白纯化、抗体制备、表达模式及免疫刺激。获得结果主要如下:1.从家蚕基因组中共鉴定出32个标准的C3HC4型锌指蛋白基因。32个C3HC4锌指蛋白基因家族可进一步分为4个亚家族。2.对所鉴定的C3HC4基因进行了染色体定位。家蚕C3HC4基因物理定位在染色体上的分布是广泛且不均匀的,10号染色体上具有明显的聚集现象。除Bm ZFPC3HC46基因包含三个基序外,其余31个基因只含有1个基序。3.构建了家蚕C3HC4基因在家蚕各组织中的表达谱,对在脂肪体中特异性表达的6个C3HC4基因、丝腺中特异性表达的4个C3HC4基因进行了q RT-PCR分析。结果表明Bm ZFPC3HC43、Bm ZFPC3HC411、Bm ZFPC3HC413、Bm ZFPC3HC417、Bm ZFPC3HC426、Bm ZFPC3HC428基因在家蚕免疫刺激后脂肪体中的表达模式不同。在丝腺不同发育时期的不同部位中Bm ZFPC3HC43、Bm ZFPC3HC411、Bm ZFPC3HC413、Bm ZFPC3HC417基因的空间表达模式存在明显的差异。4.从家蚕C3HC4型锌指蛋白基因中筛选了RNF181基因,并进行了重组表达质粒构建,成功在大肠杆菌中诱导表达。通过亲和纯化得到较高浓度和纯度的RNF181重组蛋白,成功制备了家蚕RNF181蛋白多克隆抗体。.家蚕各组织中RNF181基因的相对表达水平存在差异。其中脂肪体中的表达量最高,马氏管中表达量最低;RNF181基因在家蚕五龄期表达量最高,其次是卵,其他各龄段均有所表达。在四龄眠期后不同时期丝腺中均有表达,且都呈现先增后降的表达模式。.初步鉴定了RNF181的功能。家蚕RNF181在病原微生物刺激的表达量都表现出一定程度上调,进一步表明RNF181可能参与了家蚕的免疫应答反应。
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