青霉素的发现和使用,成功挽救了成千上万条生命。然而,随着抗生素的不合理使用,动物源细菌耐药性问题日益突出。动物源细菌耐药性的产生速度远超过了新抗生素的研发速度。因此,对重要耐药基因开展流行病学和传播机制及防控策略研究是当前控制耐药快速传播的重要途径之一。近些年,多重耐药猪链球菌的出现给临床防控猪链球菌病带来了严峻挑战。新型耐药基因optrA是第二个可介导噁唑烷酮类和苯丙醇类药物耐药的可转移耐药基因,由于它可引起人医临床治疗革兰氏阳性菌感染“最后一道防线”药物利奈唑胺和泰地唑胺的耐药以及自身高度的可转移性。因此,已引起了国内外学者的高度重视。虽然optrA基因在猪链球菌中已有零星报道,但关于其在我国猪链球菌中的流行特点和传播机制还缺乏系统性的研究。因此,开展此项研究为临床防控多重耐药猪链球菌的快速传播提供理论支持。2017～2019年间,从河南、黑龙江、广东、宁夏、新疆、青海、江西和内蒙古八省市屠宰场采集健康猪肺组织样品,经THA鲜血平板进行猪链球菌分离鉴定后,利用PCR和基因分型方法进行菌株间的亲缘关系分析;采用微量肉汤稀释法测定分离株对14种抗菌药的最小抑菌浓度;通过S1-PFGE和Southern blot对optrA基因进行定位;应用最新三代Oxford Nanopore测序技术结合二代Illumina测序技术对代表性菌株进行全基因组测序,对optrA基因的基因环境进行对比分析;利用同源重组和电击转化方法对新发现的7种optrA突变体进行功能性验证。结果表明,从国内不同地区8个屠宰场采集的肺脏样品中共分离、鉴定猪链球菌98株,其中optrA分离率为25.5%(25/98),且optrA基因均位于猪链球菌染色体上;血清型、PFGE谱型和MLST序列型的分型结果呈现多样性,发现了10种新的MLST型,菌株间亲缘关系较远;分离菌株对多种不同类型抗菌药耐药严重,尤其是对四环素、氟苯尼考和红霉素耐药严峻;通过对全基因组测序分析发现,8株菌株中存在IS1216E+optrA+IS1216E结构,通过反向PCR检测,均存在环状中间体,部分菌株optrA基因位于整合与接合元件(ICE)ICESa2603上,而且ICESa2603可跨种转移到肠球菌中;7种新发现的optrA突变体均发挥作用。研究结果提示,我国不同地区屠宰场健康猪群中分离到optrA阳性猪链球菌,无疑给食品安全和人们的健康带来了潜在的威胁。综上,在猪链球菌中,optrA基因可与插入序列IS1216E形成环状中间体插入整合到染色体上,同时optrA基因还可通过ICE从染色体上脱离进行水平传播。本研究为optrA基因在猪链球菌中的防控提供科学依据。