miR-150在结膜MALT淋巴瘤中的表达和细胞功能学研究

来源 :第二军医大学 中国人民解放军海军军医大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:seelo1332
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一、研究背景及目的:  黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma)简称MALT淋巴瘤,占所有B细胞淋巴瘤的7%~8%,可见于胃肠道、肺、甲状腺、口腔及眼附属器等部位。眼部的MALT淋巴瘤是中老年人中最常见的眼眶恶性淋巴瘤。在我国的眼附属器淋巴瘤(ocular adnexal lymphoma,OAL)中,MALT淋巴瘤占80%以上。眼附属器MALT淋巴瘤可出现在眼睑、泪腺、结膜等部位。近年来,随着肿瘤检测技术的发展、人们居住环境和生活习惯的改变,眼附属器MALT淋巴瘤的发病率不断上升,但该病的发病机制一直不是十分清楚。因此,针对眼附属器MALT淋巴瘤的发病机制的研究对临床上诊断、治疗以及判断预后有至关重要的作用。  微小RNA(microRNAs,miRNAs)是一种长约18~25nt的非编码小片段RNA,广泛存在于植物和动物中。近些年来,针对miRNAs在肿瘤中调控基因表达的相关研究已成为医学界中热门的研究方向。miRNAs通过剪切或转录抑制等方式调控靶向mRNA来参与细胞增殖、分化、凋亡和胚胎发育等一系列重要生命过程。miR-150是由22个核苷酸组成的非编码小分子RNA,定位于人类染色体19q13.33,它对B细胞和T细胞的成熟、胚胎发育以及干细胞分化等发挥重要作用。  通过targetscan程序并结合MALT淋巴瘤表达谱特征,我们选定miR-150靶向抑癌基因cbl-b作为本次试验的研究对象。由此推测miR-150与cbl-b存在着调控关系,并在结膜MALT淋巴瘤的发生发展中发挥着重要的作用。  研究目的:本实验旨在检测miR-150与cbl-b在结膜MALT淋巴瘤组织中的表达情况,并对miR-150的细胞功能学进行相关研究,为miR-150在结膜MALT淋巴瘤中的作用提出一些初步的猜想。  二、研究方法、结果:  (一)结膜MALT淋巴瘤标本miR-150和cbl-b表达水平的检测  本研究共收集了第二军医大学长征医院眼科于2016年7月至2016年10月收治的共3例(3眼)的结膜MALT淋巴瘤,患者均为汉族男性,年龄分别为68岁、71岁,均为EI期淋巴瘤。所有患者均已排除除结膜MALT淋巴瘤外的其它疾病。所有病例都经手术治疗,术后经我院病理科确诊为MALT淋巴瘤,实验用肿瘤和对照组织均为在手术时切取的新鲜标本。我们采用实时定量荧光PCR方法检测肿瘤组织和癌旁组织的miR-150和cbl-b表达水平。  结果提示:相对于对照组织,肿瘤组织中miR-150表达水平明显升高,cbl-b表达水平明显下调。  (二)B细胞淋巴瘤细胞(RPMI8226)的培养和miR-150inhibitor转染效率测定  RPMI8226细胞作为一种常用的人源B淋巴瘤细胞系,我们选取它作为本实验的研究对象,并使用miR-150抑制剂对其进行转染,观察并记录转染情况。  结果提示:DMRIE-C1.5μL,miR-150抑制剂2μL,无血清转染组效果最好。  (三)抑制miR-150对RPMI8226细胞增殖、迁移与侵袭、凋亡的影响  本实验环节,我们应用miR-150抑制剂转染成功的RPMI8226细胞株模型,研究miR-150对RPMI8226细胞功能学的影响。我们把RPMI8226细胞分别转染阴性对照组和miR-150抑制剂组,分别进行CCK8增殖实验、流式细胞技术检测和Transwell实验。  结果提示:(1)转染120h后,与阴性对照组相比,miR-150抑制剂组可以显著抑制RPMI8226细胞的增殖,P<0.001;(2)与正常组和阴性对照组相比,miR-150抑制剂组的细胞凋亡显著增加(P<0.001);(3)与阴性对照组相比,miR-150抑制剂组中RPMI8226细胞的迁移与侵袭均出现抑制(P<0.05)。  三、研究结论:  通过以上实验,我们得出结论:miR-150在结膜MALT淋巴瘤组织中的表达显著上调,其抑癌靶基因cbl-b在结膜MALT淋巴瘤组织中的表达明显下调;进一步体外细胞实验提示:抑制miR-150的表达可对B细胞淋巴瘤细胞(RPMI8226)相关生物学功能及特性产生抑制作用,这说明miR-150在结膜MALT淋巴瘤的发生发展中可能发挥重要作用,其抑癌靶基因cbl-b也有望成为结膜MALT淋巴瘤的一种新的靶向分子。
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