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目的：
探讨前列腺癌细胞系氩氦冷冻消融处理后高迁移率族蛋白B1(high mobilitygroup protein B1，HMGB1)的释放规律，以及HMGB1诱导异体外周血来源树突状细胞(dendritic cell，DC)凋亡的分子机制。
材料和方法：
前列腺癌细胞系PC-3、DU-145体外培养，氩氦冷冻消融系统（Endocare氩氦冷冻系统，美国，直径1.7mm冷冻器）冻融肿瘤细胞，收集冷冻坏死细胞上清液，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测冷冻处理前后肿瘤细胞上清液中HMGB1的浓度。采集前列腺癌患者新鲜外周血（抗凝），应用Ficoll淋巴细胞分离液，贴壁方法分离出单个核细胞(PBMC)，利用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白介素4(rhIL-4)体外诱导并培养，获取幼稚DC细胞(iDC)。流式细胞仪测定肿瘤细胞冷冻坏死液干预前后的DCs表面TLR-2和TLR-4受体表达率;预先使用TLR-2/TLR-4封闭抗体处理iDC，随后与肿瘤细胞冷冻坏死液在体外适宜培养条件下共培养，流式细胞术测定DCs凋亡率。
结果：
1.PC-3细胞系的ELISA结果:1×105/ml组、1×106/ml组、1×107/ml组PC-3细胞培养基中HMGB1浓度分别为（65.78±4.57）ng/ml、（96.73±7.64）ng/ml、(137.73±13.37) ng/ml，冷冻消融后上清液中HMGB1浓度为（150.88±6.78）ng/ml、（187.3±5.69）ng/ml、（285.2±27.45）ng/ml，差异具有统计学意义(P＜0.01);
2.DU-145细胞系的ELISA结果:1×105/ml组、1×106/ml组、1×107/ml组DU-145细胞培养基中HMGB1浓度分别为（30.44±0.25）ng/ml、（45.78±0.13）ng/ml、(66.82±0.18) ng/ml，冷冻处理后上清液中HMGB1浓度上升至（58.47±0.84）ng/ml、（98.1±4.62）ng/ml、（157.59±32.89）ng/ml，差异具有统计学意义(P＜0.01)。
3.流式细胞术检测结果:iDC细胞表面低表达TLR-2、TLR-4（15.4±3.87Vs.5.17±7.22），肿瘤细胞冷冻坏死液刺激后表达率明显升高(45.2±5.58Vs.11.48±7.55), P＜0.05。
4.流式细胞术（Annexin V-FITC）检测各干预组DCs凋亡率:肿瘤细胞冷冻坏死液与DCs共培养前后，DC细胞凋亡率（5.25±0.46）％Vs.（73.56±0.90）％;TLR-2、TLR-4抗体封闭后，冷冻坏死细胞液诱导DCs凋亡率（38.5±8.61）％Vs.(56.85±7.14)％，（P＜0.05）。
结论：
1.流式细胞术检测前列腺癌细胞氩氦冷冻消融后的死亡形式，显示大部分细胞呈碎裂坏死状态。
2.ELISA检测冷冻消融前后肿瘤细胞上清液中HMGB1的浓度，结果显示:前列腺癌细胞冷冻消融处理后HMGB1大量释放，肿瘤细胞的数量也是影响HMGB1浓度的因素。
3.流式细胞术检测发现，幼稚DC细胞低表达TLR-2和TLR-4受体，前列腺癌细胞冷冻坏死液可明显促进DC细胞表面TLR-2和TLR-4受体表达率。
4.肿瘤细胞冷冻坏死液与DCs共培养后诱导DC细胞凋亡;利用TLR-2和TLR-4抗体封闭DC细胞，明显抑制了肿瘤细胞冷冻坏死液诱导的DC细胞凋亡。
总之，前列腺癌冷冻消融后，大量肿瘤细胞坏死伴随HMGB1大量释放。HMGB1作为一种内源性的危险信号分子与DC细胞作用，诱导DC细胞凋亡，削弱了冷冻免疫反应。研究发现，HMGB1可能通过TLRs诱导DC细胞凋亡，TLRs抗体可抑制HMGB1诱导DC细胞凋亡的效果，提高冷冻免疫治疗的效果。