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沙眼衣原体(C.t)泌尿生殖道感染是近年来国内外最常见的性传播疾病,主要引起男性尿道炎和女性粘液脓性宫颈炎,临床症状轻微隐匿,但迁延难愈,引起一系列严重的并发症和后遗症。近年来临床治疗失败和耐药C.t株的报道越来越多。噬菌体phiCPG1是目前发现的第二种衣原体噬菌体,其能够和衣原体的原体结合从而感染相应的宿主衣原体,使衣原体停留在网状体阶段不能发育为成熟的具有感染性的原体,产生的原体减少,而出现异常增大的网状体。这些巨大的网状体和被γ干扰素抑制发育的衣原体形态相似,这说明该噬菌体有潜在的临床治疗价值。Vpl蛋白作为噬菌体最大的衣壳蛋白,可能在噬菌体感染衣原体的过程中发挥重要作用。[目的]原核表达豚鼠结膜炎衣原体噬菌体phiCPG1的衣壳蛋白Vpl,并将其作用于沙眼衣原体,以期发现噬菌体的衣壳蛋白Vpl对沙眼衣原体的影响,发现Vpl蛋白在沙眼衣原体中的结合位点,为理解噬菌体对宿主衣原体的作用机制提供线索,为临床上解决沙眼衣原体感染的治疗提供新的方向。[方法]用豚鼠结膜炎衣原体噬菌体phiCPG1的衣壳蛋白Vpl(浓度为53μ g/ml)与沙眼衣原体的标准株或临床野生株室温孵育3小时,接种至单层致密McCoy中,在沙眼衣原体的培养过程中均加入Vpl蛋白,碘染色包涵体计数和透射电镜观察Vpl蛋白对沙眼衣原体生长的影响。采用MTT法检测了Vpl蛋白对细胞系McCoy的细胞毒性作用,液体培养基稀释法检测Vpl蛋白对大肠杆菌BL21和DH5α的抗菌作用；为间接检测Vpl蛋白和沙眼衣原体能够结合,用MOMP和纯化原体免疫新西兰大白兔制备了兔抗MOMP和兔抗EB的多克隆抗体,同时用抗Vpl的单克隆抗体和抗MOMP的多克隆抗体共聚焦荧光显微镜观察Vpl蛋白和沙眼衣原体,以Far-Western印迹技术检测Vpl蛋白是否能够和衣原体外膜蛋白Pmp家族及MOMP蛋白结合。[结果]本实验室体外重组表达的噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vpl能够抑制沙眼衣原体的生长,对沙眼衣原体标准株E和D型的抑制率分别为78%和72%,对沙眼衣原体临床野生株的抑制率为30-70%,而该Vpl蛋白对非衣原体的其他生物体如大肠杆菌BL21、DH5α和真核细胞McCoy的生长没有影响。透射电镜结果显示Vpl蛋白能够抑制沙眼衣原体的正常发育,使包涵体内出现异常增大的网状体。将重组的MOMP蛋白和纯化沙眼衣原体EB分别免疫新西兰大白兔后,获得了高效价的抗体(1：12800),但在细胞免疫化学实验中抗MOMP的兔血清相对抗EB的兔血清特异性更强,因抗EB的兔血清也和没有包涵体的McCoy细胞结合。运用制备的抗MOMP多克隆抗体和抗Vpl单克隆抗体共聚焦荧光显微镜结果显示Vpl蛋白和沙眼衣原体存在于细胞内的同一部位。体外实验Far-Western印迹结果证实Vpl蛋白能特异结合D型沙眼衣原体标准株的外膜蛋白PmpI.[结论]我们构建的噬菌体衣壳蛋白Vpl对沙眼衣原体的生长具有明显的抑制作用,Vpl蛋白在沙眼衣原体膜表面的结合位点为PmpⅠ蛋白。首次通过实验方法证实Vpl蛋白在噬菌体对衣原体的粘附过程中发挥重要作用,证实了Vpl蛋白是噬菌体的重要毒力因子,为理解噬菌体对衣原体的作用机制提供了重要资料,为临床上沙眼衣原体感染的治疗提供了新的方向。