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在该论文工作中,利用质粒pSC101的par位点(partiton region)与透明颤菌血红蛋白基因启动子(P<,vgb>)以及透明颤菌血红蛋白基因操纵子(vgb)分别组合,在大肠杆菌质粒pKK223-3的基础上构建了四个各具特点的大肠杆菌表达质粒:pKVp(P<,vgb>)、pKVpP(P<,vgb>、par region)、pKVpV(P<,vgb>、vgb operon)、pKVpPV(P<,vgb>、par region、vgb operon)可满足大肠杆菌中蛋白表达的不同要求;利用优化后的同源重组技术,将E. coli JM83/E.coli JM101分别改造成为整合有透明颤菌血红蛋白基因操纵子的重组菌E. coli VI/E.coli Ⅶ;通过将透明颤菌血红蛋白基因启动子以及透明颤菌血红蛋白基因操纵子与革兰氏阴性菌广泛宿主载体pBBRlMCSl和pBBRlMCS2组合,构建了两个抗性不同的革兰氏阴性菌广泛宿主低溶氧诱导表达载体.结合文献报道,该工作利用增强型绿色荧光蛋白(eGFP)、甲苯双加氧酶(TOD)、聚羟基丁酸合成酶(phaCAB)作为目的表达蛋白,对该系统中不同的表达载体进行了检测.摇瓶实验结果表明在所有的表达系统中,透明颤菌血红蛋白在限氧条件下的表达量要高于富氧条件下.在整合有vgb操纵子的重组大肠杆菌Ⅵ/Ⅶ中,限氧条件下VHb的表达量大约是相同条件下重组菌E. coli JM83(pKVpPV)的1/4.同时,增强型绿色荧光蛋白和甲苯双加氧酶的介入并没有改变这两种条件下透明颤菌血红蛋白表达量的比例.含有质粒pKVp-E(P<,vgb>,egfp)或pKVpP-E(P<,vgb>,par,egfp)的重组大肠杆菌在24小时培养中,在厌氧、无抗生素条件下增强型绿色荧光蛋白的表达量至少是相对应的在富氧条件下的两倍.在表达增强型绿色荧光蛋白时检测到,与tac启动子相比,P<,vgb>不需要化学诱导剂,而且当两者均处于诱导状态时,后者表现出更高的表达强度和诱导效率,后者是前者的1.7倍.重组菌E.coli JM83(pBRVP-E)在富氧与贫氧条件下表达eGFP之比为1:3.7.含有质粒pKVpPV-T(P<,vgb>,vgb operon,par,tod)或pKVpP-T(P<,vgb>,par,tod)的重组大肠杆菌中,甲苯双加氧酶在限氧条件下有强表达.含有par区的质粒可以稳定遗传至少100代.这些结果说明这个结合有低溶氧启动子并且在细胞生长周期中稳定存在的表达系统将会在外源蛋白高密度生产中具有很大的应用前景.