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目的:本研究旨在通过观察使用补肾调经方对体外培养小鼠卵母细胞核质成熟同步情况、线粒体数量和功能、缝隙连接蛋白以及卵丘颗粒细胞凋亡相关基因的影响,探讨补肾法改善体外培养小鼠卵母细胞核质成熟同步提高卵母细胞质量的作用机制,丰富中医“肾主生殖”的理论。方法:将420只雌性ICR小鼠随机分为补肾组、血清对照组、空白对照组。处死小鼠分离窦前卵泡,分别向培养液中加入补肾调经方大鼠含药血清、正常大鼠血清和不加大鼠血清进行细胞培养,结束培养后分别收集MII期卵母细胞计算卵母细胞第一极体排出率,活细胞荧光探针观察线粒体分布,实时荧光定量PCR检测线粒体mt DNA以及线粒体转录因子UCP2和PGC-1α的m RNA表达,免疫印迹(Weston Blot)检测UCP2和PGC-1α的蛋白表达;收集卵丘颗粒细胞流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测促凋亡基因Bax、抗凋亡基因Bcl-2以及缝隙连接蛋白Cx43、Cx37的m RNA的表达,免疫印迹(Weston Blot)检测缝隙连接蛋白Cx43、Cx37的蛋白表达。结果:1.各组小鼠卵母细胞第一极体排出率比较倒置显微镜下观察发现:空白对照组、血清对照组和补肾组第一极体排出率分别为22.3%、22.7%、35.7%,卡方检验结果显示,与空白对照组和血清对照组相比,补肾组第一极体排出率升高,差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组相比,血清对照组第一极体排出率差异无统计学意义(P>0.05)。2.各组小鼠卵母细胞线粒体分布比较线粒体分布方式分为两类:均质型线粒体分布,即荧光均匀分布于胞质各部,无明显聚集现象;非均质分布,即荧光呈聚集分布或成簇分布于细胞胞质内或细胞周边。荧光探针法观察发现:空白对照组、血清对照组和补肾组线粒体均匀分布比率分别为33.3%、34.7%、42.0%。卡方检验结果显示,与空白对照组和血清对照组相比,补肾组线粒体均匀分布比率升高,但差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组相比,血清对照组线粒体均匀分布比率差异无统计学意义(P>0.05)。3.各组小鼠卵母细胞中mt DNA、PGC-1α、UCP2的m RNA表达的比较与空白对照组和血清对照组相比,补肾组mt DNA、PGC-1α、UCP2的m RNA的表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05);空白对照组和血清对照组间差异均无统计学意义(P>0.05)。4.各组小鼠卵丘颗粒细胞中Cx37、Cx43、Bax、Bcl-2的m RNA表达的比较与空白对照组相比,血清对照组Cx37的m RNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.05),Cx43、Bax、Bcl-2、Bcl-2/Bax的m RNA表达差异均无统计学意义(P>0.05);与空白对照组相比,补肾组Cx37、Bax的m RNA表达差异无统计学意义(P>0.05),Cx43、Bcl-2、Bcl-2/Bax的m RNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);与血清对照组相比,补肾组Cx37的m RNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05),Cx43、Bcl-2、Bcl-2/Bax的m RNA表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),Bax的m RNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。5.各组小鼠卵丘颗粒细胞中Cx37、Cx43蛋白表达的比较与空白对照组相比,血清对照组和补肾组Cx37、Cx43的蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05),与血清对照组相比,补肾组Cx37、Cx43的蛋白表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。6.各组小鼠卵母细胞中PGC-1α、UCP2的蛋白表达的比较与空白对照组和血清对照组相比,补肾组PGC-1α、UCP2的蛋白的表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05);空白对照组和血清对照组间差异均无统计学意义(P>0.05)。7.各组小鼠卵丘颗粒细胞凋亡率的比较与空白对照组和血清对照组相比,补肾组卵丘颗粒细胞凋亡率降低,差异均有统计学意义(P<0.05),血清对照组与空白对照组无明显差异(P>0.05)。结论:1.补肾调经方可促进体外培养小鼠卵母细胞核质成熟同步,进而提高卵母细胞质量。2.补肾调经方可上调小鼠卵母细胞mt DNA的m RNA表达,PGC-1α、UCP2的m RNA和蛋白表达,从而增加线粒体数量,改善线粒体功能。3.补肾调经方可减少卵丘颗粒细胞凋亡,上调小鼠卵丘颗粒细胞中Cx43、Bcl-2、Bcl-2/Bax的m RNA表达,增加缝隙连接的蛋白表达,增强卵丘颗粒细胞和卵母细胞之间的联系。4.补肾调经方促进体外培养小鼠卵母细胞核质成熟同步,进而提高卵母细胞质量的机制可能是通过增加线粒体数量,改善线粒体功能和减少卵丘颗粒细胞凋亡,增加缝隙连接蛋白实现的。