论文部分内容阅读
荧光检测技术由于灵敏度高、选择性好、特性参数多、动态响应范围宽而在诸多学科领域尤其是生化传感研究领域发挥着重要作用。荧光检测技术应用于生化传感研究离不开荧光探针的设计与使用。21世纪生物化学的快速发展对荧光探针的灵敏度、选择性、实时在线等性能提出了更高的要求,因此,新型荧光探针的设计、开发研究一直受到人们的极大关注。本文探讨了荧光共轭聚电解质和芘的衍生物两类荧光探针在生化传感中的应用,研究工作主要包括以下几个方面：(1)我们以共轭聚电解质P1为荧光探针,建立了一种实时、免标记、荧光增强型的检测胰蛋白酶和其抑制剂的方法。这主要是基于P1的荧光能被寡聚精氨酸(Arg6)高效猝灭,加入胰蛋白酶后由于胰蛋白酶催化水解掉了Arg6又使P1的荧光恢复。之后我们又进一步研究了胰蛋白酶抑制剂对胰蛋白酶活性的影响。实验结果表明,该法简便、快速、灵敏度高、选择性好,是一种对胰蛋白酶及其抑制剂有效的检测方法。(2)设计并合成了以磺酸根为识别基团,以芘为信号单元的水溶性荧光探针Pyrene-SO3,并将Pyrene-SO3作为荧光猝灭探针成功地应用于水溶液中高选择性的、高灵敏度的检测金属钯离子。这是由于钯离子与磺酸根之间的特异性结合作用形成了不发荧光的复合物,导致了Pyrene-SO3荧光信号显著地猝灭。该方法检测Pd2+响应线性范围为1×10-6mol/L～2.0×10-4mol/L,检测下限达到2.5×10-7mol/L(S/N=3),相对于其它金属离子有优异的选择性。(3)基于芘衍生物Py-SO3与表而活性剂十六烷基三甲基澳化铵(CTAB)复合体系的荧光恢复,建立了一种荧光增强型的检测DNA的新方法。我们以Py-SO3为敏感试剂,根据DNA与CTAB发生竞争静电作用使芘衍生物Py-SO3与CTAB形成的复合体系的荧光恢复的原理,建立了DNA传感的竞争分析新方法。该方法检测单链DNA响应线性范围为5×10-9mol/L～8.0×10-7mol/L,检测下限达到2×10-9mol/L(S/N=3),能较好的区分出单链DNA和双链DNA。