【摘 要】
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石斑鱼是中国及东南亚地区重要的养殖鱼类,近年来受到病害袭击,造成重大损失.因此有必要深入研究石斑鱼的免疫学和分子生物学.作者构建了斜带石斑鱼白细胞cDNA文库.用Tripure
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石斑鱼是中国及东南亚地区重要的养殖鱼类,近年来受到病害袭击,造成重大损失.因此有必要深入研究石斑鱼的免疫学和分子生物学.作者构建了斜带石斑鱼白细胞cDNA文库.用Tripure试剂盒从斜带石斑鱼白细胞提取总RNA,反转录合成第一链cDNA,进行长距离PCR,蛋白酶K消化,SfiI酶切,通过CHROMASPIN-400柱,回收大于500bp的cDNA,与λTriplEx2载体连接,体外包装后构建cDNA文库.库容为1.65×10<6>,重组频率为82﹪,扩增后滴度为7.5×10<9>pfu/ml.用载体上的λTriplEx2长距离插入子筛选引物,以总的cDNA文库做模板进行PCR,扩增出插入子的范围在500bp-2300bp,其中多数是在750bp-1000bp范围.从cDNA文库平板随机挑取噬菌体克隆,用PCR扩增插入子,将大于500bp的插入子纯化后测定表达序列探针（ESTs）,并用美国国立生物技术信息中心（NCBI）的BLASTX工具,与GenBank中的书籍基因或已知EST进行同源性分析.同源性分析结果,获得了G型溶菌酶（AF416458）、β-珠蛋白（AY029506）、核糖体蛋白质L32（AF450502）的全序列,以及磷脂酶A2（AY090108）、核糖体蛋白质L22（AF456341）及L35（BQ096601）的部分序列.
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