基于核酸适配体的睾酮检测方法研究

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睾酮是一种重要的环境内分泌干扰物,外源性睾酮进入哺乳动物生物体内之后能够打破其体内雌雄激素的稳态平衡,从而影响机体正常的生长发育,能够促进疾病甚至癌症的发生。目前,睾酮的检测主要集中于血清与尿液的检查,而在水环境中睾酮的检测研究较少。传统的睾酮检测方法虽然灵敏度较高、精度较好,但需要昂贵的检测仪器以及高素质操作人员,无法在保证精度情况下实现对睾酮的快速检测。本研究基于纳米金聚集的比色法技术,结合核酸适配体技术,开发出三种不同的快速检测水环境睾酮的方法,结论如下:(1)开发了一种基于高浓度盐离子聚集纳米金和睾酮特异性适配体的比色法检测睾酮的技术。高浓度盐离子可以打破分散纳米金颗粒的静电平衡,促使纳米金聚集。在最优检测条件下,检测睾酮的检测限为5.57 nM,检测线性范围为1000~2400 nM,对自来水的加标回收率为99.26~104.29%。(2)开发了一种基于阳离子聚合物聚集纳米金和睾酮特异性适配体的比色法检测睾酮的技术。阳离子聚合物能够与适配体通过静电作用形成复合物,同时也能打破分散纳米颗粒的静电平衡,促使纳米金聚集。在最优检测条件下,该技术检测睾酮的检测限为2.3 nM,线性检测范围为2.27 nM~1.8μM,对自来水的加标回收率为99.81~105.04%。(3)开发了一种基于阳离子表面活性剂聚集纳米金和睾酮特异性适配体的比色法检测睾酮的技术。阳离子表面活性剂能够与适配体形成超分子复合物,同时也能破坏纳米金颗粒间的静电平衡,使其发生聚集。在最优检测条件下,该技术检测睾酮的检测限为1.91 nM,线性检测范围为1.91~800 nM,对自来水的加标回收率为98.94~102.66%。
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