聚四氟乙烯人工血管携载血管内皮细胞生长因子基因促进内皮生长的实验研究

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第一部分 聚四氟乙烯血管材料携载基因的可行性研究 目的:试验一种聚四氟乙烯(PTFE)人工血管携载基因质粒的方法及其可行性;观察PTFE人工血管携载基因质粒后的体外释放过程,评估PTFE人工血管携载的VEGF基因质粒对体内骨骼肌细胞的转染能力。 方法:将pCDI-hVEGF121和pCDI质粒溶液(1mg/m1)分别与等体积的纤维连接蛋白(Fibronectin)溶液(1mg/ml)混合,然后各自注入1条PTFE人工血管,血管钳封闭人工血管两端,挤压人工血管,直至外壁有溶液渗出,使质粒进入人工血管壁孔隙,在超净台内自然晾干,如此反复处理3次。将pCDI-hVEGF121/pCDI质粒溶液处理过的PTFE人工血管修剪成细条(2mm×10mm),溴化乙锭(EB)标记,紫外光下观察其吸附基因质粒的情况。将经质粒溶液处理的血管材料置于生理盐水中并于不同的时间测溶液的吸光度,计算出溶液的VEGF基因质粒浓度,绘出体外释放曲线。将经pCDI-hVEGF121质粒溶液处理的血管材料(VEGF组n=24)和经pCDI质粒溶液处理的血管材料(对照组n=24)分别植入家兔左、右大腿肌肉中,不同的时间后RT-PCR方法半定量检测移植血管材料周围骨骼肌中VEGF121mRNA表达水平,Western blot方法检测VEGF121蛋白表达水平。 结果:吸附了基因质粒的血管材料经EB标记后在紫外光下呈蓝紫荧光,
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