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目的:本课题通过对“损伤血瘀证”大鼠骨骼肌细胞凋亡的情况及Caspase3、Caspase8、DRP1、FADD、RIP1、RIP3浓度变化的观察,初探“损伤血瘀证”的病理过程的微观变化,证明“损伤血瘀证”的本质是凋亡而不是坏死,以及“损伤血瘀证”的凋亡途径可能是坏死性凋亡与生理性凋亡同时存在的,并且这种相互的竞争关系是损伤破坏和损伤修复的过程。方法:1.造模方法:用“定量化重力击打法”[1]对大鼠进行“损伤血瘀证”的造模。2.分组:Wistar大鼠80只,按随机数字表分为8组。A组(空白对照),B组(造模后1小时),C组(造模后12小时),D组(造模后24小时),E组(造模后72小时),F组(造模后120小时),G组(造模后168小时),H组(造模后336小时)。3.观察指标:用Tunel法和Elisa法,检测A组(空白对照),B组(造模后1小时),C组(造模后12小时),D组(造模后24小时),E组(造模后72小时),F组(造模后120小时),G组(造模后168小时),H组(造模后336小时)骨骼肌细胞凋亡情况以及Caspase3、Caspase8、DRP1、FADD、RIP1、RIP3的浓度变化情况。4.统计学方法:采用GraphPad Prism 6软件作图分析,实验数据均用SPSS19.0软件分析。实验结果以平均数±标准差表示。组间的两两比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA),方差齐性用LSD检验,方差不齐用Tamhane’sT2检验。结果:1.用Tunel法观察骨骼肌的凋亡情况:B组(造模后1小时)和C组(造模后12小时)与空白组比较均未发生显著变化(P>0.05);造模后24小时,凋亡上升并发生显著变化(P<0.05);在24小时到120小时,凋亡发生的变化速度较缓慢(P<0.05);120-168小时,凋亡指数上升并有了显著的改变(P<0.05);168小时以后,凋亡指数缓慢下降,但差异性不显著(P>0.05)。2.Elisa法检测骨骼肌凋亡情况:(1)Caspase3组间两两对比具有统计学差异(P<0.05)的组有:A组(空白组)与B、C、D、E、F、G、H组(造模组),C组与E组、D组与E组、E组和F组、E组和G组。造模成功后,Caspase3的数值出现速度较快的上升达到最高点(P<0.05)后开始下降,72小时及120小时下降较为明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)Caspase8组间两两对比具有统计学差异(P<0.05)的组有:A组(空白组)与B、C、D、E、F、G、H组(造模组),D组与E组、E组与G组、F组和G组。造模成功后,Caspase8的数值出现速度较快的下降至最低点(24小时),之后缓慢上升(72小时)后下降(168小时),变化具有显著差异性(P<0.05)。(3)DRP1组间两两对比具有统计学差异(P<0.05)的有:A组(空白组)与B、C、D、E、F、G、H组(造模组)、C组与D组比较、D组与E组。造模成功后,DRP1的数值出现速度较快的下降最低点(1小时),然后缓慢上升(24小时)再缓慢下降(72小时),变化具有显著差异性(P<0.05)。(4)FADD组间两两对比具有统计学差异(P<0.05)的有:A组(空白组)与B、C、D、E、F、G、H组(造模组),B组与G、H组,C组与E、G、H组,D组和E、G、H组,E组与F、G、H组。造模成功后,FADD的数值缓慢上升到最高点(72小时)后缓慢下降(120小时),变化具有显著差异性(P<0.05)。(5)RIP1组间两两对比具有统计学差异(P<0.05)的有:A组(空白组)与B、C、D、E、F、G、H组(造模组),B组与C组,C组与D、F、H、G组,D组和F、G组。造模成功后,RIP1的数值出现速度较快的下降至最低点(1小时)后逐渐上升(12小时)然后再下降(24小时),之后缓慢下降,变化具有显著差异性(P<0.05)。(6)RIP3组间两两对比具有统计学差异(P<0.05)的有:A组(空白组)与B、C、D、E、F、G、H组(造模组),E组与F组,E组与G组,H组和B、C、E、F、G组。造模成功后,RIP3的数值出现速度较快的下降至低点(1小时)后逐渐上升(72小时)然后再下降(120小时),之后缓慢下降,变化具有显著差异性(P<0.05)。结论:1.“损伤血瘀证”的本质是凋亡。2.“损伤血瘀证”的凋亡过程的有较为突出的时间规律:0-24小时为凋亡的潜伏期或者萌芽期;24小时为凋亡的爆发点;24-168小时为凋亡的平台期;168小时为凋亡的转折点;168小时以后为凋亡持续恢复期。3.“损伤血瘀证”可能是凋亡与坏死性凋亡同时发生的病理过程。4.DRP1、RIP1、RIP3与“损伤血瘀证”坏死性凋亡密切相关。5.“损伤血瘀证”的凋亡通路可能没有经过Caspase8,并且Caspase-8的降低可能是导致“损伤血瘀证”坏死表征的原因。