第一部分:Rb组织、正常视网膜组织中Pax6、Math5、Brn3b蛋白表达的研究　　 目的:研究Pax6、Maht5、Brn3b在Rb和正常视网膜组织中的蛋白表达水平的差异性。　　 方法:收集5例新鲜视网膜母细胞瘤实体肿瘤组织和5例正常视网膜组织。利用WesternBlot法检测Rb实体瘤及正常视网膜组织中Pax6、Math5、Brn3b蛋白的表达。对两组中Pax6、Math5、Brn3b蛋白的表达情况,采用两个独立样本t检验和二元变量相关性进行统计学分析。　　 结果:在本组研究中,5例Rb实体瘤和5例正常视网膜组织中均可检测出Pax6、Math5、Brn3b三种蛋白的表达。与正常视网膜组织相比较,视网膜母细胞瘤实体肿瘤组织中Pax6、Math5、Brn3b蛋白的表达水平增高,经两个独立样本t检验统计方法分析,差异有统计学意义(p<0.02)；Pax6与Math5,Math5与Brn3b蛋白表达具有相关性(r>0.713,p<0.047)。　　 结论:在视网膜母细胞瘤实体肿瘤和正常视网膜组织中,均可以检测到眼发育调控基因Pax6及其下游调控分化的Math5、Brn3b蛋白的存在。与正常视网膜组织相比,三种蛋白在Rb中表达水平增高,差异有统计学意义。本研究在蛋白水平提示,在视网膜母细胞瘤生物学(发生、发展)过程中,眼发育调控基因Pax6通过上调下游促分化因子Math5和Brn3b的表达,可能保持着促进视网膜母细胞瘤细胞分化的作用。　　 第二部分:维甲酸诱导Rb细胞分化对Pax6、Math5、Brn3b蛋白表达影响的研究　　 目的:研究Rb细胞分化对Pax6、Math5和Brn3b蛋白表达影响。　　 方法:使用多聚赖氨酸促进悬浮的视网膜母细胞瘤Y79、SO-RB50细胞株贴壁生长,维甲酸(RA)诱导视网膜母细胞瘤分化,对肿瘤细胞进行免疫细胞化学(ICC)染色,光镜观察诱导分化后细胞形态。流式细胞仪检测细胞周期。WesternBlot检测Pax6、Math5、Brn3b蛋白表达水平。　　 结果:维甲酸作用后的视网膜母细胞瘤细胞生成突起增多,类似于神经细胞突触样结构,细胞突触素(synaptophysin)染色阳性(+),处于G0-G1期细胞增多。Rb细胞中Pax6、Math5、Brn3b蛋白表达水平增加,表达量与时间呈正相关。结论:在诱导分化的视网膜母细胞瘤中,Pax6、Math5、Brn3b蛋白表达水平随时间递增,说明上述三种蛋白组成的调控通路在视网膜母细胞瘤细胞分化过程中发挥了作用。提示作为眼发育的调控基因Pax6在视网膜母细胞瘤中,具有促进细胞分化的功能。