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产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是引起发展中国家婴幼儿、旅游者以及幼畜等急性腹泻的常见病原菌,E.coli K88可通过饮用受污染的水或进食未熟透的食物而感染,引起食源性疾病。随着病原微生物引起的食品安全问题凸显,致病菌的检测技术尤其是快速检测技术作为保障食品安全的重要技术支撑,在食品生产、流通全过程控制和监管以及进出口贸易中发挥着越来越重要的作用。因此,E.coli K88等病原微生物的准确、灵敏、简便快速检测方法的研发极其重要。本研究首先采用柠檬酸三钠还原法制备纳米金,优化纳米金的制备条件及其表征。结果表明:采用集热式恒温加热磁力搅拌器加热,在200 r/min的搅拌速度下,加入还原剂后继续加热20 min,制备的纳米金平均直径为16.0±0.70 nm,所制备的纳米金的浓度为3.57×10-9 mol/L。纳米金的贮存稳定性评价显示在4℃下避光贮存50 d几乎不发生聚集、沉淀等现象。最后通过Au-S键对纳米金进行修饰,连接上巯基化E.coli K88适配体,为下一步基于纳米金和适配体的E.coli K88可视化检测技术的建立奠定了基础。其次,本研究建立了一种基于金标银染结合适配体技术的E.coli K88可视化快速检测方法,通过对该快速检测方法的检测条件优化,确立了链酶亲和素包被微孔的最佳浓度为0.1mg/m L,生物素化适配体1和巯基化适配体2的最佳工作浓度均为1.0×10-6 mol/L,适配体1、纳米金-适配体2复合物与E.coli K88菌株结合的最佳条件为40℃下反应50 min,银染增强显色最佳时间150 s,显色结果肉眼可观察。在优化的实验条件下,定量检测1.0×101~1.0×105 cfu/孔范围内的E.coli K88,其拟合线性曲线指数R2=0.9903,检测灵敏度可达10 cfu/孔,检测时间约2 h,而对其它常见细菌的检测为阴性,表明此方法具有特异、可定量的优点。最后通过运用建立的E.coli K88快速检测方法,对人工模拟污染了E.coli K88后的牛奶、猪肉(猪瘦肉和五花肉)以及生食蔬菜(紫甘蓝和生菜)等三类食品样品进行检测。结果表明该快速检测方法在该三类食品样品中的检测灵敏度相当,均为102 cfu/m L(或cfu/g),检测时间2 h左右,同时在1.0×102~1.0×105 cfu/m L(or cfu/g)的E.coli K88污染浓度范围内,三类食品检测吸光值能与样品污染浓度对数值可以拟合成良好的线性关系,决定系数R2均达到0.97以上,初步表明该检测方法可用于这三类食品中E.coli K88的可视化定量检测。