铜绿假单胞菌是可导致各种急、慢性感染的一种机会致病菌,其致病性往往可通过一些毒力因子来实现,因此研究对毒力的调控是了解病原菌致病机理的关键。本论文在实验室前期获得的一株PA4760转座突变体(dnaJ-Tm)的基础上,探究了dnaJ对铜绿假单胞菌毒力的调节作用及其机理。铜绿假单胞菌DnaJ是一种热休克蛋白,DnaJ与DnaK共同构成分子伴侣系统,参与新合成蛋白的折叠与降解,以维持细胞内的蛋白稳态。相关研究表明,热休克蛋白DnaJ对生长极其重要,生长实验结果表明,铜绿假单胞菌dnaJ突变后生长并未显示出生长缺陷的情况,同时结果也发现,dnaJ突变后不影响铜绿假单胞菌在不利条件下(高温、低温)的生长。此外,研究表明,在其它细菌中,dnaJ的突变可导致毒力发生显著变化。本研究通过结晶紫染色、运动实验等方法对dnaJ-Tm中主要毒力进行了测定,包括绿脓菌素、弹性蛋白酶以及胞外DNA(eDNA)等。结果表明dnaJ突变后绿脓菌素、生物被膜、运动、弹性蛋白酶以及eDNA等毒力均显著降低,但鼠李糖脂合成显著增加。同时,通过果蝇感染实验发现,dnaJ突变后致病性显著降低。这说明dnaJ基因对铜绿假单胞菌毒力起着重要的作用。此外,通过检测基因表达、外源添加eDNA和绿脓菌素等方式研究dnaJ对毒力调节的具体机制。研究结果表明,dnaJ可能可通过调节phz基因(phz M、phz S、phz A1、phz A2)表达,影响绿脓菌素的合成,并进而影响eDNA的水平,最终影响生物被膜的形成和黏附的能力。此外,研究发现,dnaJ可能可通过rpo S来调节三型分泌基因rsm A的表达。综上所述,铜绿假单胞菌热休克蛋白基因dnaJ可调节绿脓菌素、生物被膜、运动等毒力,此外,dnaJ可调节三型分泌基因rsm A的表达。因此,铜绿假单胞菌热休克蛋白基因dnaJ导致致病性降低可能是综合导致的结果。