目的：初步探讨TRIM25蛋白过表达对人肺癌细胞株H1299顺铂敏感性的影响及其分子作用机制，为深入研究肿瘤药物敏感性提供实验依据。方法：用基因克隆技术构建TRIM25高表达质粒载体，转化大肠杆菌DH5α感受态细菌，筛选阳性克隆，将检测确认的大肠杆菌进行质粒抽提，行酶切和测序鉴定，命名为pGCMV-trim25。以脂质体介导pGCMV-trim25瞬时转染肺癌细胞株H1299为实验组。转染空载体pGCMV/neo的为空载体对照组，未转染的为空白对照组。荧光显微镜下观察转染效率，Western blot法检测TRIM25蛋白表达水平及其过表达时PKM2蛋白水平的变化。用顺铂分别处理转染前后的H1299细胞24h，采用MTT法检测顺铂对肺癌细胞体外增殖能力的抑制情况，Annexin V/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡。结果：本实验成功构建了pGCMV-trim25真核质粒载体。瞬时转染肺癌细胞H1299，转染率可达到80%以上。同未转染空白组和空载体组比较，转染TRIM25后的H1299细胞中TRIM25蛋白表达水平明显增加（P<0.05)；且TRIM25过表达时，细胞中PKM2的表达水平降低（P<0.05）。用DDP处理后，实验组细胞的生长抑制率明显降低（P<0.01），转染组对DDP的耐药指数(RI)为8.889，转染后细胞的药物敏感性下降。转染组细胞凋亡率也明显降低（P<0.05），有统计学意义。结论:1.成功构建了pGCMV-trim25真核质粒载体，瞬时转染pGCMV-trim25能特异性上调TRIM25的蛋白表达。2. TRIM25基因高表达时，PKM2的表达水平与TRIM25呈负相关性。3. TRIM25基因高表达时，肺癌细胞H1299对顺铂的敏感性降低并且抑制细胞凋亡。