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梅山猪的高产仔数与其胚胎存活率较高有关,而何种原因导致其具有较高的胚胎存活率还尚处于研究阶段。然而梅山猪与大白猪产仔数的差异,为我们研究母猪胚胎存活的机理提供了良好的动物模型。转录组测序(RNA-Seq)能够对细胞或组织的全部转录活动进行检测和分析,可以从全基因组层次挖掘已知和未知的基因、可变剪接体及SNPs等,是研究基因结构和功能的主要方法。因此本实验选取梅山和大白母猪作为研究对象,在母猪妊娠18及32天时,采取子宫组织。制作石蜡切片,HE染色(苏木精-伊红染色,hematoxylin-eosin staining)观察其子宫的形态结构,并显微摄影,进行组织学比较;另一方面,分离子宫内膜组织利用RNA-Seq技术对其子宫内膜组织的转录组进行分析,并通过实时荧光定量PCR对测序结果进行验证,分离鉴定不同猪种在妊娠不同天数子宫内膜组织中差异表达的基因;同时,采集不同妊娠天数梅山和大白母猪外周血液进行雌激素及孕激素含量测定。取得了如下研究结果:1.在妊娠18天时,大白猪子宫上皮为单层柱状细胞,而梅山猪子宫上皮呈现为假复层柱状细胞。在妊娠32天时,大白猪子宫上皮为双层矮柱状细胞,而梅山猪子宫上皮为双层立方状细胞。妊娠32天时大白猪子宫腺均为浆液性,而梅山猪子宫腺除了浆液性外,含有少量粘液性子宫腺。对子宫腺体数量和直径统计发现妊娠18天时单位面积腺体数量多于妊娠32天,而妊娠18天子宫腺体的直径要小于妊娠32天(P<0.05)。2.使用酶联免疫法测定在妊娠9、12、15、18、25、32天大白及梅山母猪外周血清雌激素和孕激素含量。发现梅山猪血清中雌激素的浓度在所有时期都显著高于大白猪雌激素的浓度(P<0.05)。而孕激素含量显示,在妊娠18天前,梅山猪孕激素浓度显著高于大白猪孕激素浓度(P<0.05),在妊娠18天以后两品种母猪孕激素含量无明显差异。3.通过转录组测序,在大白和梅山母猪子宫内膜组织中分别获得185715299和 198390212 条 Clean reads;且分别有 178409362 和 189763831条reads 比对到猪参考基因组上。生物信息学分析表明,妊娠18天大白猪与梅山猪和妊娠32天大白猪与梅山猪分别有360和218个差异表达基因。大白猪妊娠18天与32天和梅山猪妊娠18天与32天,分别有1848和1889个差异基因。从中筛选了 3个差异表达长链非编码 RNA(XLOC1250320、XLOC2017489、XLOC315655),通过实时荧光定量PCR分析验证,结果表明与测序数据趋势一致,说明了测序的准确性。并且此三个基因均在子宫内膜组织高表达,暗示这三个长链非编码RNA在子宫内膜内具有重要作用。4.克隆获得猪XLOC2017489基因的5’侧翼2442bp序列,通过比对发现5个潜在的SNP位点。通过在线软件PROMO预测,发现该序列包括了多个转录因子结合位点,如C/EBPα、C/EBPβ、HOX43、ER-α、STAT5A、PB-B、P53、Sp1 等,而且C/EBPα、C/EBPβ等具有多个特异结合位点。5.构建了 9个XLOC2017489启动子缺失片段的pGL3报告质粒(Q1-Q9),分别转染PK细胞(猪肾细胞)和HeLa细胞(人子宫颈癌细胞),检测其荧光活性,判断猪XLOC 2017489启动子核心区域可能位于-212~+15之间。