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乳腺癌是发生于乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤,因其高发病率及异质性而严重威胁女性的健康。三阴乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）是乳腺癌中预后最差的一种,不具有乳腺癌中常见的任何受体,对内分泌治疗及靶向治疗均不敏感。因此,临床医生需着眼于乳腺癌的异质性,并以此制定个体化精准治疗方案;尤其是对TNBC肿瘤侵袭和转移机制的深入了解,从而识别新的靶基因并将其用作TNBC的治疗剂。本课题由两部分内容组成,在第一部分研究中,旨在通过Ion Torrent测序平台对中国东北地区乳腺癌患者进行多基因突变谱分析,探讨其与临床病理特征的关系;并寻找可以作为预测乳腺癌患者生存预后的突变基因。我们采用Ion Torrent测序平台（来自武汉良培基因生物科技有限公司）对来自286例乳腺癌患者的521例标本进行了31种基因的全外显子进行突变检测,并以其中91血标本作为对照组,筛选出各组织中的有害/致病基因突变（体细胞非同义突变）,并分析其与临床病理资料及生存预后的相关性,寻找可以作为预测乳腺癌患者生存预后的突变基因。结果显示:入组患者286例,其中54.2%（155/286）患者携带11种有害/致病突变基因,共检测出179个体细胞非同义突变,其中5.6%（16/286）的患者标本中检测出2种以上突变基因。11种基因中,PIK3CA突变频率最高,65.4%（117/179）;TP53次之,突变频率20.7%（37/179）,AKT 7.8%（14/179）,PTEN2.2%（4/179）,其余7种基因突变频率较低,均为0.06%（1/179）。在280例乳腺癌（除外6例原位癌）四种分子分型中,被检测出的11种基因突变频率的分布各不相同。进一步将其分为HR+/Her2-型和三阴性两个治疗组,其中三阴性组伴随较高的TP53突变率（21.8%）和较低的PIK3CA突变率（21.8%）;而HR+Her2-组则检测出较低的TP53突变率（10.1%）和较高的PIK3CA突变率（50.0%）,具有统计学意义,其余突变基因的突变率在两组无差异。本研究中有72例患者,我们分别对其癌组织、癌旁组织和正常组织进行二代测序,3种不同组织的体细胞非同义突变基因种类及频率各不相同。此外,我们进一步将该组70例患者（除外2例原位癌）按分子分型分成四组,每组中癌组织、癌旁组织及正常组织的基因突变频率各不相同。各组突变数归一化后,除外HER2阳性型组（该组人数较少）,其余三组中癌组织中的基因突变检出率均高于癌旁组织及正常组织。最后,我们对286例患者的临床病理资料、基因测序结果与患者5年生存率的关系进行了COX多变量分析。结果显示PTEN-PI3K/AKT信号通路突变者有较差的预后（P=0.044）,尤其是TNBC（P=0.038）。在第二部分研究中,旨在探讨microRNA-206（miR-206）是否通过靶向TM4SF1影响TNBC的侵袭性生长和转移情况,从而为TNBC的治疗寻找新的治疗策略。我们通过RT-q PCR和Western Blot分析20例人乳腺癌组织中miR-206和TM4SF1的基因表达和蛋白翻译情况。以MDA-MB-231细胞为模型,使用miR-206 mimics上调细胞中miR-206的表达,通过Crisper/cas9技术敲除TM4SF1,进而研究miR-206与TM4SF1的关系以及两者在TNBC中的作用。通过MTT、流式细胞术、Transwell细胞侵袭技术等确定miR-206和TM4SF1在体外对TNBC的增殖、细胞周期、迁移和侵袭影响,通过BALB/c裸鼠模型检测miR-206和TM4SF1在体内对TNBC肿瘤侵袭性生长和转移情况的影响。结果显示:在人乳腺癌标本中,TM4SF1在TNBC亚型中的表达水平显著高于正常乳腺组织。相反,miR-206在乳腺癌组织中低表达,尤其是TNBC。用miR-206模拟物转染MDA-MB-231细胞后,TM4SF1的m RNA和蛋白水平均显著下调。相反,下调miR-206后,TM4SF1表达明显升高。我们在MDA-MB-231细胞中上调miR-206,与敲除TM4SF1的MDA-MB-231细胞相比,二者都能显著抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭。体内实验亦表明,TM4SF1的表达水平与MDA-MB-231细胞的侵袭性生长及肺转移相关。综上,本课题的研究结果表明,中国东北地区乳腺癌有害/致病基因突变谱有别于欧美、日韩、中国南方等地;PTEN-PI3K/AKT信号通路中相关基因突变是预测乳腺癌患者,尤其是TNBC患者生存预后的独立指标。同时,在TNBC中,miR-206负调节TM4SF1的基因表达;在体外,miR-206通过TM4SF1影响MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭;在体内,miR-206通过TM4SF1抑制MDA-MB-231细胞的侵袭性生长和肺转移;miR-206/TM4SF1可能是TNBC的潜在治疗剂/治疗靶点。