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牛病毒性腹泻-粘膜病病毒(Bovine viral diarrhea-mucosal disease virus,BVDV)是黄病毒科、瘟病毒属(Flaviviridae Pestivirus)的成员,主要引起牛病毒性腹泻-粘膜病(BVD-MD),症状为腹泻,急、慢性粘膜病,持续性感染与免疫耐受,免疫抑制,母畜流产、死胎和畸胎等。该病主要发生于牛,犊牛更易感,还可感染其它动物及人。牛病毒性腹泻粘膜病是全球性传染病,具有较高的感染率,我国二十几个省市自治区均存在本病,且在各易感动物群中的感染已呈日益扩大趋势。且常规的BVDV 疫苗不能提供有效的保护,因此从分子生物学水平上对该病原进行研究具有重要的意义。BVDV E0、E1 和E2 基因位于基因组5’端的三分之一部分,分别编码病毒的结构蛋白(囊膜蛋白E0、E1 和E2),囊膜蛋白E0 和E2 具有抗原性,而E1 的抗原性未见有报道。根据GenBank 中BVDV Osloss 株基因组序列设计一对引物,应用RT-PCR 方法体外扩增BVDV VEDEVAC-Like 株E0 基因,将其克隆至pMD18-T 载体,序列测定及同源性分析表明,BVDV VEDEVAC-Like 株E0 基因与BVDV VEDEVAC(AJ585412)、Oslos(sM96687)、NADL(AJ133738)、SD1(M96751)及Oregon C24V(AF091605)株E0 基因核苷酸同源性分别为99.41%~80.91%。根据这一结果,参考GenBank 上发表的BVDV VEDEVAC 株基因组序列设计二对引物,应用RT-巢式PCR(RT-nested PCR)方法扩增E2 基因,并进行序列测定及同源性分析,结果表明BVDV VEDEVAC-Like 株E2 基因与BVDV VEDEVAC(AJ585412)、Osloss(M96687)、SD1(M96751)、Oregon C24V(AF091605)及NADL(AJ133738)株E2 基因核苷酸同源性分别为98.58%~72.82%。根据E2 基因测序结果,参考GenBank 上发表的BVDV VEDEVAC 株基因组序列设计一对引物,扩增E1 基因,并进行序列测定及同源性分析,结果表明BVDV VEDEVAC-Like 株E1 基因与BVDV VEDEVAC(AJ585412)、Osloss(M96687)、SD1(M96751)、Oregon C24V(AF091605)及NADL(AJ133738)株核苷酸同源性分别为100%~76.75%。系统发生分析结果表明BVDV VEDEVAC-Like 株E0、E1 和E2 基因与VEDEVAC 株亲源关系较近。利用DNA重组技术,将BVDV E0、E1和E2基因分别亚克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,构建E0、E1 和E2 基因重组原核表达载体pGEX-6P-E0、pGEX-6P-E1 和pGEX-6P-E2。将上述重组质粒转化至工程菌,在IPTG 诱导下重组质粒pGEX-6P-E0、pGEX-6P-E1 和pGEX-6P-E2 均得到成功表达。本研究克隆BVDV E0、E1 和E2 基因,并将其在原核系统中表达,旨在为基因工程诊断抗原和亚单位疫苗的研究奠定基础,同时为E1 蛋白抗原性的阐明提供必要物质基础。