【摘 要】
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研究背景肿瘤新生血管形成在肿瘤的发生发展中占有重要的地位,正如Peter Carmeliet在Nature上撰文指出:没有肿瘤新生血管形成与存在,肿瘤就可能不会继续生长及转移。外泌体可随体液循环转移到全身各个部位,因此可以协同肿瘤的远处转移。Notch信号通路能够协同BMP、VEGF和HIF等信号通路调控微环境中血管内皮细胞及组织细胞的增殖及分化,进而发挥对血管生成的调控作用。肿瘤血管中Dll4呈
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研究背景肿瘤新生血管形成在肿瘤的发生发展中占有重要的地位,正如Peter Carmeliet在Nature上撰文指出:没有肿瘤新生血管形成与存在,肿瘤就可能不会继续生长及转移。外泌体可随体液循环转移到全身各个部位,因此可以协同肿瘤的远处转移。Notch信号通路能够协同BMP、VEGF和HIF等信号通路调控微环境中血管内皮细胞及组织细胞的增殖及分化,进而发挥对血管生成的调控作用。肿瘤血管中Dll4呈高表达,但其功能却与正常血管中相同,都是抑制过度增殖、减少血管数量及促使管腔的扩大,从而增加肿瘤细胞的供血量。有研究报道JAG1与DLL4在乳腺癌转移中发挥着不同的作用,关于乳腺癌对微环境中血管生成的影响结论还不够清晰,其中JAG1和外泌体扮演者何种角色不得而知,相关功能实验也并不完善。目的探究JAG1对三阴性乳腺癌（TNBC）恶性表型的影响,并初步研究乳腺癌微环境血管生成的机制。方法1.体外培养人TNBC细胞231和231B,Q-PCR实验检测Notch信号通路相关分子在TNBC中的m RNA表达水平。2.免疫组化和免疫荧光实验检测肿瘤组织中血管内皮细胞生长因子VEGFA和血管内皮标记CD31的表达。3.JAG1重组蛋白处理231细胞和DAPT处理231B细胞,用CCK-8法来检测JAG1和DAPT对TNBC增殖的影响。4.Hoechst 33258染色实验检测JAG1和DAPT对TNBC凋亡的影响。划痕愈合实验检测TNBC的迁移能力。5.Transwell小室实验检测TNBC的侵袭能力。内皮细胞粘附实验检测TNBC的粘附能力。6.使用Western blot检测231和231B增殖、凋亡、迁移侵袭和粘附相关蛋白的水平。7.接下来体外培养血管内皮细胞HUVEC,乳腺癌条件培养基处理血管内皮细胞HUVEC。8.CCK-8实验检测HUVEC的增殖能力。基质胶成管实验检测HUVEC的成管能力。9.收集TNBC条件培养基并通过速度梯度离心提取外泌体,检测外泌体是否被摄入到HUVEC细胞。10.si RNA敲低HUVEC的lnc Malat1,检测mi R-140-5p/JAG1/VEGFA的表达变化。结果1.与231细胞相比,231B表达更高的JAG1（P＜0.05）。2.与231肿瘤相比,231B肿瘤表达更高的VEGFA和CD31。3.与231空白组相比,r JAG1处理组中231细胞的迁移、侵袭和粘附能力明显受到促进（P＜0.05）。4.迁移侵袭相关蛋白Twist1和Snail的水平均增加（均P＜0.01）,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量增加（P＜0.05）,而DAPT明显抑制231B的相关现象和指标。5.TNBC条件培养基明显促进了HUVEC的血管生成能力,其中r JAG1处理组表现出更强的促血管生成能力。6.TNBC条件培养基中检测出外泌体,JAG1促进TNBC的外泌体分泌量,并外泌体可以被HUVEC细胞摄取。7.TNBC中外泌体携带lnc Malat1靶向mi R-140-5p-JAG1/VEGFA信号通路结论JAG1可能影响TNBC的恶性表型,并通过外泌体促进微环境的血管生成。
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DNA链置换反应在DNA纳米技术中扮演着重要的角色,其在生物传感领域亦有许多应用。在此,本文针对DNA链置换的新机制及其在突变检测中的应用进行了如下研究:首先,本文介绍了一种新型的DNA链置换调节机制——合作分支迁移（Cooperative branch migration,CBM）。CBM通过调节分支迁移域的互补性来控制DNA链置换反应,其与大多数调控工具兼容并可连续微调跨越5个数量级的反应速率
背景:固相萃取（solid phase extraction,SPE）-高效液相色谱-电化学或质谱法检测血浆或24 h尿甲氧基去甲肾上腺素（Normetanephrine,NMN）、甲氧基肾上腺素（Metanephrine,MN）是临床常用的嗜铬细胞瘤（Pheochromocytomas and Paragangliomas,PPGLs）诊断方法。但固相萃取操作繁琐,处理时间长,并且血浆和24 h
临床检测RNA病毒和疾病相关RNA往往需要扩增靶标,方法耗时长,操作繁琐,假阳性率高。为了快速简单检测RNA,适应即时检测需求,利用Cas13a识别靶RNA的高特异性和高效率反式剪切酶活性信号放大作用,我们提出了一种通过Cas13a酶内链置换介导的级联循环反应快速检测RNA的策略,不需要目标扩增,实现RNA的简便快速测定。本研究首次证明了CrRNA/Cas13a复合物酶内链置换的可行性。通过设计和
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