背景:溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis,UC）是一种慢性非特异性炎性结直肠疾病,主要影响18-50岁年龄段的中青年,腹泻,黏液脓性血便和腹痛等临床症状和严重影响患者的生活质量。因本病难治愈、易复发、癌变风险高,UC已被世卫组织列为难治病。本病的发病涉及多种复杂机制,其中,肠屏障的完整性遭到破坏是目前公认的重要环节。最新研究指出氧化应激、炎症和凋亡三者可引起肺、肾、心血管上皮损伤,但三者是否可以破坏和影响机械屏障,从而造成UC的发生或加重,目前却尚未见报道。清肠温中方是北京中医药大学东方医院消化科李军祥教授,在继承我国著名老中医董建华院士学术思想,总结其临床经验后,将连理汤加减化裁制定而成的方剂。前期在单中心的双盲双模拟RCT临床观察中发现,清肠温中方具有改善轻、中度活动期UC患者临床症状、降低疾病活动度并提高患者生活质量的作用;动物实验也证实了该方主要具有减轻炎症、修复黏膜病变的作用,但前期的基础研究多以如何调控炎症反应为主,缺少对其他作用机制的进一步验证。目的:1.从氧化应激、炎症和凋亡角度,尤其是从氧化应激与炎症环节,探讨以上环节对机械屏障潜在的作用影响,阐明清肠温中方调控UC的潜在机制。2.从细胞骨架破坏、炎症反应和缺氧环境角度开展清肠温中方的拆方研究,阐明清肠温中方在UC治疗中,针对不同病机更加有效的药物组成单元,为清肠温中方的药物配伍和临床应用提供更多的科学依据。方法:实验一:采用自由饮用DSS溶液建立急性UC大鼠模型,以不同剂量清肠温中方浸膏粉水溶液和美沙拉秦悬浊液灌胃干预。通过疾病活动指数（DAI）、结肠湿重、结肠黏膜大体损伤程度评分（CMDI）、组织学病变评分、结肠Occlundin、NF-κ B p50蛋白免疫组化染色、血清和结肠组织中氧化应激物质（SOD、MDA、GSH-px）、血清（IL-1α、IL-6、TNF-α）和结肠（MPO）炎性介质Elisa检测、结肠凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、Akt、p-Akt、Caspase-3）的蛋白印迹检测、肠黏膜杯状细胞的阿利新蓝染色和TUNEL凋亡实验,开展清肠温中方多靶向调控急性UC大鼠氧化应激-炎症-凋亡,修复肠黏膜机械屏障的作用研究。实验二:以TNBS/无水乙醇灌肠建立急性UC大鼠模型,以不同剂量清肠温中方浸膏粉水溶液和美沙拉秦悬浊液灌胃干预。通过DAI、结肠湿重和长度、CMDI、组织学病变评分、结肠Occlundin、NF-κB p50蛋白免疫组化染色、血清和结肠组织中氧化应激物质（SOD、MDA、GSH-px）、血清炎性介质（IL-6、IL-13、TNF-α、IFN-γ）Elisa检测,开展清肠温中方基于机械屏障对急性UC大鼠氧化应激-炎症环节的调控作用研究。实验三:采用自由饮用DSS溶液建立慢性UC小鼠模型,以不同剂量清肠温中方浸膏粉水溶液和美沙拉秦悬浊液灌胃干预。通过DAI、结肠湿重、CMDI、组织学病变评分、结肠Occlundin、NF-κ B p50蛋白免疫组化染色、血清和结肠组织中氧化应激物质（SOD、MDA、GSH-px）、血清炎性介质（IL-1 β、IL-4、IL-5、IL-6、TNF-α）Elisa检测,开展清肠温中方基于机械屏障对慢性UC小鼠氧化应激-炎症环节的调控作用研究。实验四:采用自由饮用DSS溶液建立急性UC大鼠模型,以清肠温中方拆方和美沙拉秦悬浊液灌胃干预。以DAI、CMDI、组织学病变评分、结肠HIF-1 α蛋白印迹检测、结肠VIM和K8蛋白免疫组化染色、血清IP10、CXCR3的Elisa检测,开展清肠温中方拆方对细胞骨架破坏、炎症反应和缺氧环境的调控作用研究。结果:实验一:与模型组相比（p＜0.05）,清肠温中方能够显著降低急性UC大鼠的DAI、CMDI、组织学病变评分;明显减轻结肠湿重;促进结肠Occludin、抑制NF-κ B p50蛋白表达;减少血清和结肠中MDA含量并提高SOD、GSH-px活性;减少血清中IL-1α、IL-6、TNF-α含量并降低结肠中MPO活性;减少结肠中凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3表达,降低p-Akt/Akt表达比值,同时促进抗凋亡蛋白Bcl-2表达;明显促进杯状细胞表达;抑制肠上皮的凋亡,且以中剂量的效果更为明显。实验二:与模型组相比（p＜0.05）,清肠温中方能够显著降低急性UC大鼠的DAI、CMDI、组织学病变评分;明显减轻结肠湿重;促进结肠增长;促进结肠Occludin、抑制NF-κ B p50蛋白表达;减少血清和结肠中MDA含量并提高了 SOD、GSH-px活性;减少血清中IL-6、TNF-α并升高IL-13含量,且中剂量清肠温中方具有更好的调控效果。实验三:与模型组相比（p＜0.05）,清肠温中方能够显著降低慢性UC小鼠的CMDI、组织学病变评分,但对DAI改善效果不明显;增加结肠湿重;促进结肠Occludin、抑制NF-κB p50蛋白表达;减少血清和结肠中MDA含量并提高了 SOD、GSH-px活性;减少血清中IL-1 β、IL-6、TNF-α并升高IL-4、IL-5含量,且中剂量清肠温中方组疗效更为显著。实验四:与模型组相比（p＜0.05）,清肠温中方拆方各组均能够显著降低急性UC大鼠的DAI、CMDI评分;清热燥湿、清热燥湿联合温中健脾、凉血化瘀联合温中健脾组和全方能明显降低组织学病变评分。全方及拆方各组均能降低结肠中VIM/K8蛋白表达比值,其中以凉血化瘀联合温中健脾组效果最为明显。全方及拆方各组均能减少血清中IP10含量,凉血化瘀联合温中健脾组和清热燥湿联合温中健脾组效果更加明显;除凉血化瘀组外各组均能明显降低血清CXCR3含量,其中以清热燥湿联合凉血化瘀和凉血化瘀联合温中健脾组组降低更多,对炎症反应的调控作用,联合组疗效优于美沙拉秦组。全方及拆方各组均能减少结肠中HIF-1α表达,以凉血化瘀联合温中健脾组、清热燥湿联合温中健脾组和全方组减少更为明显,但各组间尚不存在统计学差异。结论:1.清肠温中方可以多靶向调控UC中过度激活的氧化应激-炎症-凋亡,包括有效减轻UC中的脂质过氧化物并提高抗氧化酶活性,恢复氧化-抗氧化平衡;调控多种不同的炎性因子和炎症介质减轻炎症反应;抑制凋亡蛋白并促进抗凋亡蛋白表达直接减轻肠上皮凋亡。多维度的减少了机械屏障所承受的打击因素,并通过提高紧密连接表达、促进杯状细胞增生、修复黏膜结构,使受损的机械屏障得以重建,最终发挥针对UC的疗效。2.综合细胞骨架、炎症反应和缺氧环境三方面研究结果可以发现,清肠温中方全方的作用优于凉血化瘀联合温中健脾组和清热燥湿联合温中健脾组,而凉血化瘀联合温中健脾组和清热燥湿联合温中健脾组又比单用温中健脾、清热燥湿或凉血化瘀有更明显的调控作用。进一步证实了在UC的治疗中,清热燥湿或凉血化瘀的祛邪治法,只有在联合了温中健脾的扶正药物后,才能更好的发挥修复细胞骨架、减轻炎症反应和改善缺氧环境的作用。提示我们在UC的临床治疗中,需要重视顾护正气,即温中健脾,才能取得更好的疗效。