烟草黑胫病菌生防放线菌发酵条件的优化及定殖动态

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烟草黑胫病是烟草生产上的重要病害,重发年份严重影响烟叶的产量和品质,给烟草行业带来巨额经济损失。在烟草黑胫病的重发区,化学防治仍然是控制其危害的重要手段。化学防治虽然具有防效好、见效快的优点,但频繁、单一、过量的使用杀菌剂易造成农药残留、病菌抗药性、生态污染等后遗症,生物防治因在植物病害防治方面具有低毒、无抗药性、无污染等优势,正逐步被应用到烟草黑胫病防治领域。拮抗放线菌H-3对烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)具有良好的抑制效果,可应用于烟草黑胫病的防治。本文对H-3的发酵条件进行了优化;检测了H-3发酵液的化合物成分;研究了H-3菌株在烟草植株及微生物肥的定殖能力,探讨了H-3对烟草黑胫病的盆栽和田间防效等。主要研究结果如下:1.H-3发酵条件的优化。将小米浸汁培养基原配方中碳源替换为25.75 g/L的玉米淀粉、氮源替换为2.13 g/L的酵母膏、无机盐替换为1.88 g/L的硫酸铵时,发现H-3在优化后培养基的菌体浓度和无菌代谢液对烟草疫霉抑制率显著优于小米浸汁培养基原配方;同时,当培养时间在84-96 h,温度为28℃,酸碱度pH值为7.0,转数为180-200 rmp时,H-3发酵液菌体浓度相较于其他条件更高。2.H-3发酵液的LC-MS/MS检测。结果发现H-3发酵液正离子模式测得化合物856种,负离子模式测得化合物260种;鉴定得到部分化合物具有一定的抑菌效果,将可以鉴定到化合物按生物学功能分类,结果显示多数化合物具有加速细胞新陈代谢功能。3.H-3对烟草叶片酶活性的影响。发现烟草植株经H-3菌悬液灌根后的12 d内,烟叶的SOD酶、POD酶活性相较于空白对照均有提升,MDA浓度相较于对照组下降。4.H-3的定殖能力测定。发现H-3菌悬液对盆栽烟草灌根后35 d内,H-3可定殖于烟草根系和茎部;H-3在基础有机肥、基础有机肥中混入15%或20%无机肥的复合肥中均具有一定的定殖能力。5.H-3对烟草黑胫病的盆栽防效。发现H-3菌悬液对盆栽烟草灌根后,烟草黑胫病的病株率和病情指数相较于空白对照组均有一定程度降低,且施用高剂量H-3菌悬液的防效显著优于低剂量。6.H-3菌肥对烟草黑胫病的田间防效。大田防效结果显示,不同施肥处理对烟草黑胫病的防效有显著差异,施用微生物肥的烟田防效优于施用复合肥;施用微生物肥的处理中,含H-3的微生物肥对烟草黑胫病的防效优于无H-3的微生物肥,且H-3菌量高的微生物肥对烟草黑胫病的防效显著优于H-3菌量低的微生物肥。
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