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目的基于血脂异常大鼠动物模型,以化浊调脂方进行干预,利用生物信息学方法探讨运脾化浊法对血脂异常大鼠microRNA及其靶基因表达的影响。方法1.将84只雄性Wistar大鼠按体重随机分为正常组(n=10)与高脂组(n=74),正常组大鼠给予普通饲料喂养,高脂组大鼠给予高脂饲料喂养,4周后测量血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C含量。建立血脂异常大鼠模型后,以不同剂量化浊调脂1号方、化浊调脂2号方干预8周,普伐他汀钠片、血脂康胶囊作为阳性对照药。2.提取大鼠肝脏组织miRNAs，Fold-change筛选两个样品间(没有重复)的差异表达miRNAs(上调时Fold-change≥2.0,下调时Fold-change≤0.5)。利用生物信息学数据库检测差异表达的miRNAs,筛选出与脂质代谢关系密切的miRNAs,并预测得到相关靶基因。3.实时荧光定量PCR法检测miRNAs的表达。结果l.miRNA表达谱使用GenePix Pro 6.0提取芯片扫描图像上的探针表达信息,经筛选共得到700个miRNA信息。2.差异表达的miRNAs①高脂模型组大鼠肝脏差异表达的miRNAs:与普通组相比,血脂异常可以改变大鼠肝脏miRNA表达谱,其中10个miRNA上调,42个miRNA下调。上调最明显的是mo-miR-342-5p,下调最明显的是rno-miR-10a-3p。②普伐他汀钠片对miRNA表达的影响：与高脂模型组相比,普伐他汀钠片可以影响大鼠肝脏组织miRNA的表达,使71个miRNA上调,35个miRNA下调。其中上调最明显的是rno-miR-10a-3p,与脂代谢密切相关的miRNA,如rno-miR-214-5p表达同样上调。下调最明显的是rno-miR-9a-5p,rno-miR-155-5p,rno-miR-148b-3p亦有明显下调。③血脂康胶囊对miRNA表达的影响：与高脂模型组相比,血脂康胶囊可以影响大鼠肝脏组织miRNA的表达,使93个miRNA上调,76个miRNA下调。其中上调最明显的是rno-miR-10a-3p,与脂代谢密切相关的miRNA,如rno-miR-214-5p,表达同样明显上调。下调最明显的是rno-miR-184, rno-miR-155-5p、rno-miR-122-5p等也出现明显的表达下调。④化浊调脂1号方对miRNA表达的影响：化浊调脂1号方可改变大鼠肝脏组织的miRNA表达谱,与高脂模型组相比,使53个miRNA上调,24个miRNA下调。上调最明显的是rno-miR-10a-3p,rno-miR-214-5p、rno-miR-30b-5p也有明显的上调。下调最明显的是rno-miR-7a-1-3p,rno-miR-122-5p表达亦有明显下调。与普伐他汀组相比,使42个miRNA上调,69个miRNA下调。上调最明显的是rno-miR-9a-5p,no-miR-27b-3p、 rno-miR-148b-3p、rno-miR-30b-5p等亦出现明显表达上调。下调最明显的是mo-miR-471-3p,rno-miR-122-5p也有明显表达下调。与血脂康组相比,使82个miRNA上调,159个miRNA下调。上调最明显的是rno-miR-880-3p,rno-miR-148b-3p、 rno-miR-155-5p、rno-miR-30b-5p同样明显上调。下调最明显的是rno-miR-193a-5p, rno-miR-33-3p亦出现明显下调。⑤化浊调脂2号方对miRNA表达的影响：化浊调脂2号方可以改变大鼠肝脏组织的miRNA表达谱。与高脂模型组相比,运脾化浊2号方使99个miRNA上调,63个miRNA下调。上调最明显的是rao-miR-10a-3p,rno-miR-214-5p、rno-miR-30b-5p同样明显上调。下调最明显的是rno-miR-184,而miR-155-5p也出现明显下调。与普伐他汀组相比,运脾化浊2号方使50个miRNA上调,29个miRNA下调。上调最明显的是rno-miR-122-3p,rno-miR-30b-5p表达同样明显上调。下调最明显的是rno-miR-1b,而rno-miR-155-5p表达也出现明显下调。与血脂康组相比,运脾化浊2号方使54个rniRNA上调,45个miRNA下调。上调最明显的是mo-miR-144-3p,rno-miR-30b-5p表达同样明显上调。下调最明显的是mo-miR-193a-5p，rno-miR-155-5p表达也明显下调。3.miRNA靶基因预测①化浊调脂1号方组：将筛选出的差异表达较显著的miRNAs:rno-miR-411-3 p、 rno-miR-329-3p、rno-miR-877、mo-miR-345-5p、rno-miR-30b-5p、rno-miR-20b-5p、 mo-miR-122-5p、mo-miR-214-5p等在数据库进行预测,共检测到miRNA相关的777个靶基因。②化浊调脂2号方组：将筛选出的差异表达较显著的miRNAs:rno-miR-10a-3p、 rno-miR-147、rno-miR-142-3p、rno-miR-300-5p、rno-miR-125b-5p、mo-miR-324-3p、 rno-miR-199a-3p、mo-miR-340-5p、rno-miR-17-5p、mo-miR-339-5p、mo-miR-148b-3p、 rno-miR-184等在数据库进行预测,共检测到miRNA相关的1109个靶基因。③综合预测结果,进行GO/KEGG分析,筛选出PPARD、ABCG1及LDLR等3个与脂代谢密切相关的靶基因。4.PCR验证结果①rno-miR-155-5p:与高脂组比较,各给药组表达下调,差异无统计学意义(P>0.05) ；② rno-miR-10a-3p:与高脂组比较,各给药组表达下调,差异无统计学意义(P>0.05)；③ rno-miR-214-5p:与高脂组比较,各给药组表达下调,P=0.013,差异具有统计学意义。其中,与高脂组比较,化浊调脂1号方组、2号方组表达明显下调,差异有统计学意义(P=0.008,0.014)；④ rno-miR-148b-3p:与高脂组比较,各给药组表达下调,差异无统计学意义(P>0.05) ；⑤ rno-miR-33-3p:与高脂组比较,各给药组表达下调,差异无统计学意义(P>0.05)；但与高脂组比较,化浊调脂2号方组表达明显下调,P=0.028,差异具有统计学意义；⑥ rno-miR-33-5p:与高脂组比较,各给药组表达下调,差异无统计学意义(P>0.05)；⑦no-miR-122-5p:与高脂组比较,各给药组表达下调,P=0.048,差异具有统计学意义；其中,运脾化浊1号方组与2号方组表达明显下调,差异有统计学意义(P=0.039,0.006)；⑧ rno-miR-30b-5p:与高脂组比较,各给药组表达上调,差异无统计学意义(P>0.05) 。结论：1.血脂异常可以影响大鼠肝脏组织多种microRNA的表达；2.运脾化浊法可以干预血脂异常大鼠肝脏组织多种microRNA的表达；3.运脾化浊法对脂代谢的调节作用可能是通过抑制mo-miR-122-5p、rno-miR-33-3p的表达而实现的。