研究背景及目的流感病毒引起的流行性感冒是一种常见的呼吸道传染病,大部分患者症状轻微,并发症较少,是一种自限性疾病。但是,2009年出现的甲型H1N1流感(Influenza A virus subtype H1N1)却迅速在世界范围内传播、人群普遍易感、死亡率高。流感病毒所致病症的差异是因病毒基因的组成不同所致。流感病毒根据核蛋白(NP)和基质蛋白(MP)的不同,分3个类型,即甲、乙、丙型,甲型抗原变异性最强,常引起世界大流行,乙型变异性较弱,可引起局部爆发,丙型抗原性比较稳定,仅引起婴幼儿感染和成人散发病例。20世纪以来甲型流感病毒变异所引发的大流行为人类健康带来了重大威胁。因此,在流感爆发期间对流感患者进行快速诊断,无疑对迅速切断传染源,及早进行治疗具有重大意义。众所周知,流感样患者大多数以发热为首发,伴咽痛、咳嗽、咳痰等症状,临床医生容易造成漏诊,确诊有赖于实验室辅助检查,目前确诊流感病毒的方法有很多,而早期抗原快速初筛的方法成为临床现场初步诊断的重要手段。因此对于流感样症状的患者我们应高度怀疑流感病毒感染,应用抗原快速法进行初筛,隔离传播源,即使初筛阴性,同样应进一步行确诊检查。目前没有特异性的抗病毒药物对抗流感病毒,但达菲等非特异性抗病毒制剂的应用可以缓解流感症状,减少并发症的出现。由于达菲的副作用、耐药性、价格昂贵及储备有限的弊端,限制了它的应用。因此,挖掘祖国传统中药制剂对流感患者进行治疗抗病毒治疗不失为一种经济有效的方法。天龙复方制剂是以我院著名中医科邱志楠教授为首研制的中药制剂,经“乙醇回流提取”方法从天龙复方制剂中提取的主要有效作用成分是总黄酮。以往的研究表明黄酮化合物具有抗氧化、抗过敏、抗炎及抗流感病毒等生物活性,对疱疹病毒、肝炎病毒亦有一定的抑制作用。因此本课题针对甲型流感病毒快速诊断和治疗方面的不足,开展了相应研究,即寻找快速筛查甲型流感病毒感染的方法,观察天龙复方制剂对甲型流感患者的治疗作用及天龙复方制剂的有效成分总黄酮对甲型流感病毒抑制作用的初步研究。第一部分甲型流感病毒的快速筛查方法目的寻找出甲型流感病毒快速筛查的方法方法收集2009年11月至2010年8月就诊于广州医学院第一附属医院发热门诊及中医科门诊的流感样患者184例的鼻咽分泌物进行病毒检测,以2009年9月卫生部颁发的以qRT-PCR检测流感为诊断甲型流感病毒标准,首先比较GICA和DIEFA两种方法对甲型流感病毒的快速检出率,以确定敏感性好、特异性高的方法为甲型流感病毒快速筛查法,再选择灵敏性好、特异性更高的DIEFA方法对流感样患者进行甲型流感病毒的初步诊断。结果一、184例中的40例标本,男18例,女22例,平均年龄31.2岁,GICA检出率为30%,DIEFA检出率为55%,qRT-PCR法阳性率为52.5%,相对于qRT-PCR,GICA的灵敏度和特异性分别是42.8%,82.4%;DIEFA的灵敏度和特异性分别是85.7%,78.9%,两种检测方法具有统计学意义(p<0.05),DIEFA要优于GICA;二、184例标本,男96例,女88例,平均年龄32.68岁,DIEFA检出率45.6%,qRT-PCR法阳性率为61.4%,相对于qRT-PCR法,DIEFA的敏感度:68/95=71.5%,特异性:73/89=82%,两者一致性:68+73/184=76.6%。据卡方检验p>0.05,两种方法没有统计学意义。结论DIEFA可作为临床上现场快速筛查甲型流感病毒的方法第二部分天龙复方制剂对流感患者的治疗作用目的对流感患者进行临床特征评估并观察天龙复方制剂对流感患者的治疗作用方法从病史、症状、实验室辅助检查评估流感患者的临床特征与月份,年龄分布的关系;将病例随机分为三组:达菲组,天龙复方制剂组,对照组,各组给予相应处理。结果1.流感患者以中青年为主,季节性甲型流感与甲型H1N1流感在同一时期可以同时感染,5月及6月主要以乙型流感为主;7月及8月主要以季节性甲型流感为主,冬季以甲型H1N1流感为主。2.实验室血常规检查显示甲型流感H1N1和季节性甲型流感没有区别(p>0.05)。3.天龙复方制剂组与达菲组治疗流感患者有疗效,(两组在疗效上相比,p>0.05差别没有统计学意义)。结论1.在我院就诊的流感患者分布与月份、年龄有关;同一患者可以同时感染甲型H1N1流感病毒和季节性甲型流感病毒。2.天龙复方制剂对流感患者具有退热,减轻症状,缩短病程的作用。第三部分总黄酮对甲型流感病毒的抑制作用目的初步研究总黄酮对甲型流感病毒的抑制作用方法应用MTT法检测总黄酮的药物毒性,血凝试验法检测不同浓度总黄酮对甲型流感病毒的效应结果1.不同浓度总黄酮对甲型流感病毒有抑制作用,以200ug/ml最为明显;2.总黄酮对甲型流感病毒无直接杀伤作用;3.总黄酮对甲型流感病毒没有预防保护作用。结论总黄酮可抑制甲型流感病毒的复制。