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一.背景和目的 经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)已成为冠心病血管重建治疗的重要手段。冠状动脉内支架又为PTCA的成功和疗效提供了可靠的保障,并有效的降低了PTCA术后RS的发生率。但支架仅是依赖其支撑作用改变了病变血管的收缩性塑形,并不能抑制血管损伤后的内膜增生。RS率仍有10—15%,严重影响了该技术的远期疗效。有关RS防治研究的文献较多,但所提出的防治措施的疗效均未达到理想的水平,因此探讨新的防治措施势在必行。近年来研究表明内皮细胞(EC)与RS的发生发展密切相关,血管损伤后EC再生修复的速度对RS的程度起着关键作用,加速EC的增殖修复可能是防治RS的有效措施。同时,PTCA及支架术后新生EC发生的EC功能不全,一氧化氮合酶(NOS)表达降低也被认为是导致RS的重要因素。 研究表明,磁场具有广泛的生物学效应,可影响培养的细胞基因的转录和翻译,改变细胞跨膜信号的转导。对于损伤性病变,磁场具有促进细胞增殖与分化,有利于组织修复的作用。经磁场作用的酶,大都有增强活性的倾向。本研究目的旨在观察低频电磁场(LFEMF)和恒磁场(SMF)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖活性和NOS表达的影响,为LFEMF和SMF用于RS的防治提供一定的理论依据。 二.方法 第四军医大学硕十学位论文 *)人脐静脉内皮细胞系ECVl04体外培养并传代,分别给予不同的 LFEMF和SMF作用。口广h-胸腺啼陡脱氧核昔一H丁dR)掺入法分析LFEMF 和SMF对HUVEC的DNA合成的影响。刀流式细胞术分析LFEMF和SMF 对HUVEC细胞周期的影响/闪ABC免疫酶染色法并采用德国Leica Q500MC 图像分析系统分析LFEMF和SMF对HUVEC的NOS表达的影响。 三.结果 口)LFEMF对HUVEC增殖活性的影响:勺1dR掺入法结果显示,除 20 mT 30 min组,40 mT 20 min组外,其他各 LFEMF作用组的Cpm值与对 照组均有显著差异(P、0刀引。各LFEMF作用组对HUVEC的增殖活性随作 用时间延长呈现先促进后抑制的趋势。流式细胞技术结果显示LFEMF促使 GI期细胞活跃而向S期转变,LFEMF作用组S%显著高于对照组:GI%较 对照组降低,增佰指数阶值(S+G。M)%增高,表现为促进HUVEC增殖的 作用。但随作用时问延长,促进作用减弱变为抑制作用T刃刀5人p)LF*M F 对 HUVEC的 NOS表达的影响:除 60mT 20min组,60ruT 30min组外,其余 uE*F作用组内皮细胞结构型*0引ec*OS)表达均较对照组增强J<0刀引, 各 LFEMF作用组与对照组诱生型 NOS厂NOS)均无表达。o3)SMF对 HUVEC 增殖活性及NOS表达的影响:SMF组CpC值与对照组相比显著增高(P<0刀引。 S*F组S%显著高于对照组;o%较对照组降低,k1值增高,差异显著 (P<0刀引。SNIF组CCNOS表达较对照组显著增强(P<0刀1)。SMF组与对照 组iNOS均无表达。 四.结论 (l)适当磁场强度和作用时间的 LFEMF具有促进培养的 HUVEC增殖 活性的作用。 (二)适当磁场强度和作用时间的 LFEMF对培养的 HUVEC的 NOS的表 达具有选择性作用,显著增强了HUVEC的ecNOS的表达,但并不增强iNOS 的表达。 ()适当磁场强度和作用时间的 SMF具有促进培养的 HUVEC增殖活性 -3- 第四军医大学硕十学位论文 的作用。 (4)适当磁场强度和作用时间的SMF对培养的HUVEC的NOS的表达 具有选择性作用,显著增强了HUVEC的ecNOS的表达,但并不增强iNOS 的表达。 (5)适当的磁场对PTCA及支架植入术后的RS可能具有防治作用。