小麦分蘖相关基因TaMOC1-Ls的分离与功能分析

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小麦(Triticum aestivum L.)是我国重要的粮食作物,其产量决定的机理一直是该领域研究的热点。分蘖决定了小麦的株型和产量,是重要的农艺性状之一。前期工作中,我们已证实TaD27s通过影响独脚金内酯合成进而影响小麦的分蘖数目。在TaD27-RNAi腋芽转录组数据中,一个GRAS家族基因在转基因腋芽中较野生型表达水平明显降低,其序列与水稻中的OsMOC1及小麦TaMOC1s同源性较高,因此我们推测其可能参与小麦分蘖数目的调控。为理解小麦分蘖的分子机理,本研究对该基因进行了分离,并将其命名为TaMOC1-Ls基因,进而对其功能进行了初步分析,主要研究结果如下:TaMOC1-Ls位于6号染色体,具有三个等位基因,分别是TaMOC1-L-A、TaMOC1-L-B和TaMOC1-L-D。氨基酸序列比对显示,TaMOC1-L-A、TaMOC1-L-B和TaMOC1-L-D与OsMOC1和TaMOC1s同源性均高于60%。进化树分析结果显示TaMOC1-Ls属于LAS亚家族,与OsMOC1和TaMOC1s均有较高的亲缘关系。实时定量PCR结果显示,TaMOC1-Ls在小麦单棱期茎尖、二棱期茎尖、小穗原基、小花原基和根中均有所表达,其中TaMOC1-L-D表达量最高。原位杂交结果显示,TaMOC1-Ls在叶原基、腋芽、小穗原基均有表达。TaMOC1-Ls表达量受低温、脱落酸等环境因子调控。亚细胞定位及转录激活实验结果显示,TaMOC1-Ls是定位于细胞核的转录激活转录因子。为了研究TaMOC1-Ls在小麦中的功能,构建了TaMOC1-L-D-OX过表达载体和TaMOC1-Ls-Cas基因敲除载体,进行农杆菌介导的小麦遗传转化。目前已获得36株T1代TaMOC1-L-D过表达转基因植株和T0代34株TaMOC1-Ls-Cas介导的基因敲除的阳性植株。初步的研究结果显示,过表达株系中TaMOC1-L-D表达量较野生型明显上升,分蘖数明显减少。TaMOC1-Ls-Cas分蘖表型正在鉴定中。综上所述,TaMOC1-Ls可能参与小麦分蘖数目的调控,该实验结果可以为揭示小麦分蘖调控的分子机理提供有价值的信息。
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