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第一部分SOCS3调控IL-6/JAK2/STAT3信号通路抑制主动脉瓣间质细胞成骨样分化目的：钙化性主动脉瓣膜病(Calcified aortic valve disease, CAVD)已成为全球最常见心血管疾病之一。然而,其发病机制尚不清楚。本研究通过调控人主动脉瓣间质细胞的SOCS3表达,探究其在LPS刺激下瓣膜间质细胞成骨样分化中的重要作用,并试图研究证实JAK2/STAT3是否参与其发生及发展。方法：使用Western blots及real-time PCR方法分别比较正常和钙化主动脉瓣膜来源的间质细胞中SOCS3表达差异。构建SOCS3表达载体,转染瓣膜间质细胞后调控SOCS3表达水平。LPS刺激瓣膜间质细胞检测SOCS3表达,检测间质细胞成骨样分化及成钙能力,检测间质细胞分泌多种炎性细胞因子能力,检测SCOS3对间质细胞中STAT3磷酸化水平的影响。转染SOCS3不同表达载体后,检测瓣膜间质细胞成骨样分化的改变及其分泌炎性细胞因子的改变。使用IL-6中和抗体,拮抗IL-6生物学效应后检测SOCS3抑制瓣膜间质细胞成骨样分化的作用。使用JAK2/STAT3通路抑制剂AG490后检测SOCS3抑制瓣膜间质细胞成骨样分化的作用。结果：钙化瓣膜间质细胞中SOCS3表达增高。LPS刺激瓣膜间质细胞后,瓣膜间质细胞中SOCS3表达上调,其成骨样分化及成钙能力均显著增强,IL-6、IL-8和MCP-1分泌量显著增高,此外LPS可上调瓣膜间质细胞中STAT3磷酸化水平。SOCS3抑制LPS刺激下瓣膜间质细胞成骨样分化及IL-6和MCP-1表达。IL-6介导SOCS3的抑制作用,且SOCS3通过调控JAK2/STAT3通路发挥抑制间质细胞成骨样分化和抗炎作用。结论：SOCS3通过抑制IL-6分泌和STAT3磷酸化水平进而抑制主动脉瓣间质细胞在LPS刺激下增强的成骨样分化。IL-6在主动脉瓣间质细胞成骨样分化中扮演关键角色。本研究结果将为未来钙化性主动脉瓣疾病的预防和分子靶向治疗提供新的研究方向。第二部分IL-6诱导人主动脉瓣间质细胞成骨样分化的实验研究目的IL-6对人主动脉瓣间质细胞成骨样分化及成钙能力的影响。方法选取主动脉夹层(Debakey I型)患者行Bentall+全主动脉弓置换+支架象鼻术后正常主动脉瓣膜,胶原酶消化法分离培养主动脉瓣间质细胞,稳定传代3-5代后的细胞纳入实验。实验分为三组：对照组(培养基),刺激组(104g/ml IL-6),中和组(10μg/ml IL-6加10μg/ml anti-IL-6抗体).采用免疫荧光法检测a-SMA及vimentin两种标志蛋白鉴定原代培养细胞表型；采用蛋白质印记法(Western blots)检测三组中成骨样标志蛋白碱性磷酸酶(ALP)及骨形态发生蛋白(BMP)-2的表达差异；利用茜素红染色法,检测比较三组中主动脉瓣间质细胞成钙能力并进行定量分析。结果胶原酶消化法分离的细胞中,超过90%细胞表达a-SMA及vimentin蛋白。IL-6干预后,刺激组主动脉瓣间质细胞中ALP及BMP-2表达均显著增高(P<0.05for both markers, n=3);中和组中两者的表达与对照组相比未见显著差异(P>0.05,n=3),而与刺激组相比两者表达均显著减低(P<0.05,n=3)。茜素红染色结果显示刺激组钙结节数量明显增多,而中和组中钙结节数量跟刺激组相比则显著减低。钙沉淀定量分析进一步确认茜素红染色结果(刺激组比对照组：83.33±9.71比7.33±4.16μg/mg总蛋白,P<0.05,n=3；中和组比刺激组：11.67±2.08比83.33±9.71μg/mg总蛋白,P<0.05,n=3)。结论IL-6可增强人主动脉瓣间质细胞成骨样分化及成钙能力。