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背景和目的随着人口增加及老龄化程度加重，糖尿病患者日益增多，研究证实，糖尿病能增加脑卒中的危险性，糖尿病病人发生脑梗死时，往往病情重、病程长、预后差，有关糖尿病合并脑血管病的病理生理和治疗方面的研究日益受到神经科学领域的重视，但目前对缺血性脑血管病的治疗还不是很令人满意，溶栓治疗还存在治疗时间窗和并发症问题，所以进一步探讨缺血性损伤时内源性保护机制，可能会对缺血性损伤时神经保护及神经功能的恢复带来希望。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和碱性成纤维因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)作为神经营养因子与血管的发生和生长有密切关系。近年来发现它们在神经系统有刺激神经元、胶质细胞、轴突的生长和成活的作用，因此它们在神经系统的血管和神经保护作用越来越多的受到关注，但关于糖尿病合并脑梗死后，VEGF和bFGF表达情况的研究尚不多见。本研究在糖尿病模型基础上，进行局灶脑缺血再灌注模型(MCAO)制备，对大鼠进行脑梗死体积计算并采用免疫组化方法研究糖尿病脑缺血再灌注后大鼠脑组织内VEGF和bFGF表达的变化，初步观察二者在糖尿病大鼠和正常大鼠脑缺血再灌注后的差异，为临床治疗缺血性脑血管病特别是合并糖尿病者提供理论依据。材料与方法1．76只雄性SD大鼠(体重240-310g)随机分成3组：假手术组(糖尿病大鼠和正常血糖大鼠各6只)、正常血糖脑缺血再灌注组(简称CI组，n=32)和糖尿病脑缺血再灌注组(简称为DM+CI组，n=32)，后两组按再灌注6h、12h、24h和48h分为4个亚组，分别为10、10、6、6只大鼠。2．采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导产生实验性糖尿病大鼠模型，大鼠血糖≥16.7mmol/L为糖尿病模型复制成功，饲养6-7周。选择两组成模者进一步采用Zea-longa法制作大鼠脑缺血再灌注模型。假手术组除不将尼龙线插入颈内动脉外，余同手术组。3．采用Zausinger六级神经功能评分标准对各组脑缺血再灌注后大鼠进行神经功能评分，评分小于1分或大于3分的大鼠弃之不用。4．选择脑缺血再灌注后6h和12h各4只大鼠，采取TTC染色做脑梗死体积测定。免疫组织化学法观察不同再灌注时间点VEGF和bFGF阳性表达。分别比较糖尿病组和正常血糖组大鼠VEGF和bFGF表达的差异。5．应用SPSS10.0统计软件进行数据处理，实验数据用((?)±s)表示，比较采用单因素方差分析，多组均数间比较采用t检验。以α=0.05作为检验水准。结果1．缺血再灌注模型制作成功后，对其进行神经功能学评分，发现糖尿病大鼠的神经功能学评分(2.13±0.71)较正常大鼠(1.28±0.46)高，差异有非常显著性意义(P<0.01)。2．鼠脑TTC染色结果：非梗死区脑组织被染成红色，梗死区不能被染红而呈现苍白色，且苍白区与大脑中动脉供血分布区域一致；随脑缺血再灌注时间延长，梗死体积逐渐加大，相同再灌注时间点糖尿病组梗死体积大于正常血糖组(P<0.05)。3．HE染色光镜观察：假手术组细胞形态正常未发现明显的病理变化，糖尿病组和正常血糖组比较，梗死区周围水肿带明显，神经间质疏松，血管扩张。梗死区内神经元变性、坏死严重，残存神经元体积缩小，核固缩。4．免疫组织化学观察：假手术组脑组织可见少量bFGF阳性表达，VEGF阳性蛋白未见表达。糖尿病组和正常血糖组脑缺血再灌注6h后出现VEGF、bFGF蛋白阳性表达，12h后反应明显增强，24h达高峰，之后迅速减少，但是糖尿病组在在各时间点的表达较正常血糖组显著减少(P<0.01)。各时间点VEGF、bFGF阳性表达集中在梗死灶周围，表达的细胞主要是神经元和胶质细胞，其次是血管内皮细胞。结论1．在相同脑缺血再灌注条件下，糖尿病组脑组织损伤较正常血糖组重，表现为梗死体积大、神经功能缺损症状重、神经功能评分高于正常血糖脑缺血再灌注组(P<0.01)。2．VEGF、bFGF在糖尿病大鼠脑缺血再灌注后的表达不足，可能是糖尿病加重了大鼠脑缺血再灌注损伤的内源性机制之一。