近年来,贵州省冷水鱼养殖产业发展迅速,但随着养殖规模增加、饲养密度加大和饲养管理水平滞后等,导致冷水鱼养殖水体环境不断恶化,病害问题日益突出,严重制约了冷水鱼养殖产业的健康发展。目前,对冷水鱼病害问题的防治措施主要是使用抗生素和化学药物,但不合理的使用会导致药物残留、细菌耐药性等问题出现。免疫增强剂能有效提高动物机体免疫力,且具高效、无污染、无残留等特点,已成为当前水产养殖业疾病防控的研究热点。本文以贵州冷水鱼养殖种类代表——鲟鱼为对象,通过体外筛选与体内应用,开展冷水鱼免疫增强剂筛选与初步应用研究,以期为贵州冷水鱼养殖产业健康发展提供技术支撑。1.冷水鱼免疫增强剂体外筛选（1）鲟鱼外周血白细胞分离条件优化:采集鲟鱼外周血,以分离的白细胞数量和白细胞活率为指标,在单因素试验基础上设计正交试验以确定鲟鱼外周血白细胞分离条件各因素最佳优化组合。选择percoll密度（67%、72%和77%）、离心转速（400×g、600×g和800×g）和离心时间（20 min、25 min和30 min）进行L9（3~3）正交试验,经极差分析与方差分析,结果:当percoll密度72%、离心转速800×g和离心时间20 min时,鲟鱼外周血白细胞分离数为（4.13±0.12）×10~6个/m L,白细胞活率为（99.10±0.11）%,即在此条件下分离得到的鲟鱼外周血白细胞数与细胞活率最佳。（2）鲟鱼免疫增强剂体外筛选:以上述优化条件制备鲟鱼外周血白细胞,分别以10种常用免疫增强剂8个不同浓度处理,测定其呼吸爆发活性与吞噬活性,结果:与对照组相比,β-葡聚糖、甜菜碱、胸腺肽、姜黄素、牛磺酸、绿原酸和壳寡糖处理组SPO值均极显著提高（P＜0.01）,胸腺肽、绿原酸和壳寡糖处理组STI值均极显著提高（P＜0.01）,胸腺肽、绿原酸和壳寡糖处理组NBTB%与NBTC%值均＞100%;与对照组相比,β-葡聚糖、甜菜碱、胸腺肽、牛磺酸、绿原酸、壳寡糖和鱼肝油处理组部分浓度下吞噬活性(OD510nm)值显著或极显著提高（P＜0.05或P＜0.01）,仅胸腺肽、绿原酸和壳寡糖处理组吞噬活性(OD510nm)值＞1.7;综上所述,选择胸腺肽、绿原酸和壳寡糖作为冷水鱼鲟鱼的免疫增强剂。2.冷水鱼免疫增强剂初步应用研究取胸腺肽、绿原酸和壳寡糖,分别以200 mg/kg剂量添加至基础饲料中投喂鲟鱼（即胸腺肽组、绿原酸组和壳寡糖组）,同时设基础饲料组（即对照组）,分别于第0 d、14 d、28 d和42 d时采集样品,测定鲟鱼生长性能、组织结构、生化指标和免疫指标,结果:（1）生长性能指标:与对照组相比,胸腺肽组、绿原酸组和壳寡糖组鲟鱼增重率和特定生长率均显著或极显著提高（P＜0.05或P＜0.01）,而鲟鱼肥满度、内脏指数和脾脏指数均差异不显著（P＞0.05）,但壳寡糖组鲟鱼肝脏指数显著降低（P＜0.05）。（2）组织结构观察:与对照组相比,仅胸腺肽组鲟鱼肝脏在第28 d时出现细胞质溶解、细胞界限模糊,第42 d时出现细胞核溶解、细胞界限模糊和空泡变性;3种免疫增强剂均使鲟鱼脾脏动脉周围淋巴鞘和椭球周围淋巴鞘数量更多、形状更大且排列更为紧密;绿原酸和壳寡糖均能减轻肠绒毛上皮细胞空泡变性程度,改善绒毛损伤程度,显著或极显著提高绒毛长度、V/C比值和上皮内淋巴细胞数（P＜0.05或P＜0.01）,仅绿原酸组显著降低隐窝深度（P＜0.05）。（3）常规生化指标:与对照组相比,胸腺肽组、绿原酸组和壳寡糖组鲟鱼血清总蛋白、白蛋白和球蛋白含量有极显著提高（P＜0.01）,但胸腺肽组球蛋白含量在第42 d时显著降低（P＜0.05）,绿原酸组和壳寡糖组血清尿酸、尿素氮、谷丙转氨酶和谷草转氨酶含量显著降低（P＜0.05）,胸腺肽组血清尿素氮含量在第14 d时显著降低（P＜0.05）,谷丙转氨酶含量在第42 d时显著升高（P＜0.05）。（4）氧化与抗氧化指标:与对照组相比,胸腺肽组鲟鱼血清RNS和脾脏MDA含量显著或极显著降低（P＜0.05或P＜0.01）,血清、肝脏及脾脏NO、SOD、CAT和GSH-Px含量显著或极显著提高（P＜0.05或P＜0.01）;绿原酸组鲟鱼血清RNS和MDA含量显著或极显著降低（P＜0.05或P＜0.01）,血清及肠道NO和SOD及血清、肝脏和肠道CAT和GSH-Px含量显著或极显著提高（P＜0.05或P＜0.01）;壳寡糖组鲟鱼血清RNS、血清及肝脏MDA含量显著显著或极显著降低（P＜0.05或P＜0.01）,血清及肠道NO与SOD和血清、肝脏及肠道CAT与GSH-Px含量显著或极显著提高（P＜0.05或P＜0.01）。（5）细胞因子指标:与对照组相比,胸腺肽组、绿原酸组和壳寡糖组鲟鱼血清TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-6和IL-8含量显著或极显著提高（P＜0.05或P＜0.01）;同时胸腺肽组和壳寡糖组鲟鱼血清IL-10含量亦显著或极显著提高（P＜0.05或P＜0.01）。（6）其它免疫指标:与对照组相比,胸腺肽组、绿原酸组和壳寡糖组鲟鱼血清补体C3、C4、LZM、AKP和ACP含量显著或极显著提高（P＜0.05或P＜0.01）;胸腺肽组鲟鱼脾脏补体C3、肝脏及脾脏LZM和ACP、肝脏AKP含量显著或极显著提高（P＜0.05或P＜0.01）;绿原酸组鲟鱼肝脏与肠道补体C4以及肠道LZM、AKP和ACP含量显著或极显著提高（P＜0.05或P＜0.01）;壳寡糖组鲟鱼肝脏补体C3、肝脏及肠道补体C4以及肠道LZM、AKP和ACP含量显著或极显著提高（P＜0.05或P＜0.01）。综上所述,本研究通过对鲟鱼外周血白细胞呼吸爆发活性与吞噬活性测定,从10种常用的动物免疫增强剂中筛选得到了冷水鱼鲟鱼的3种免疫增强剂即胸腺肽、绿原酸和壳寡糖;通过饲喂养殖试验,从血清学、组织学和免疫学3个方面证实,筛选得到的3种免疫增强剂（胸腺肽、绿原酸和壳寡糖）均能有效提高鲟鱼的免疫抵抗力,为冷水鱼免疫增强剂的推广应用提供科学依据。