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目的：本课题首次采用无血清悬浮培养和免疫磁珠分选(MACS)相结合的方法进行人脑胶质瘤U251细胞系中脑肿瘤干细胞(BTSC)的分离。然后进行U251细胞系中肿瘤干细胞的凋亡机制的探讨，从而为脑胶质瘤的防治及肿瘤疫苗的研制提供新的策略和分子靶标。方法：首先将U251细胞接种于含有生长因子的无血清培基，通过无血清悬浮培养法得到含有大量BTSC的脑肿瘤干细胞球(BTS)，分离其中的BTSC，运用免疫磁珠分选法对其进行分选和纯化，并用流式细胞仪计数，检测分选后的CD133阳性率。然后，对分选得到的BTSC进行凋亡机制的探讨，分别运用流式细胞周期检测、AO／EB双染法和RT-PCR等方法，从不同层面阐明U251细胞系中BTSC的凋亡减少。结果：利用无血清悬浮培养和免疫磁珠分选(MACS)相结合的方法可以从U251细胞系中分离出阳性率达到60％上的BTSC。通过流式细胞周期检测及AO／EB双染色和RT-PCR的方法，发现在人脑胶质瘤U251细胞系中BTSC凋亡减少，其中抑制凋亡的基因表达上调、促进凋亡的基因表达下调。结论：1．U251细胞系中存在一定比例的脑肿瘤干细胞，利用含生长因子的无血清培基悬浮培养技术，可以有效的分离培养BTS，将其与免疫磁珠分选法相结合可以分离得到阳性率较高的BTSC，为BTSC的分离提供了新策略。2．U251细胞系中BTSC的凋亡减少，这可能是其无限生长的重要分子机制之一。3．纯化后的脑肿瘤干细胞为脑肿瘤的靶向基因治疗及相关肿瘤疫苗的研制提供了重要的实验基础，为脑胶质瘤的防治提供了新的策略和分子靶标。