论文部分内容阅读
研究背景热性惊厥与癫痫有着密不可分的联系，有相当数量的热性惊厥起病的患儿可能转化为癫痫，单纯性热性惊厥、复杂性热性惊厥在一定条件下都有可能发展为癫痫，但是复杂性热性惊厥发展为癫痫的概率更高。但癫痫与热性惊厥的预后相差很大，对家庭的精神及经济负担也有着巨大的差异和影响。基因检测是近几年研究热性惊厥与癫痫关系的热点问题，高通量基因测序为癫痫遗传学的研究提供了更精准的依据。对癫痫的发生、演变、治疗及预后提供更有力的诊治思路，为进一步明确癫痫的病因、早期诊断、个体化治疗、指导预后提供更多依据。因此我们对以热性惊厥起病的儿童癫痫的临床表型及相关致病基因进行深入研究，探讨这些基因在热性惊厥起病的癫痫儿童中的重要作用及其机制，进而指导治疗及预后。
研究目的总结分析热性惊厥起病的儿童癫痫临床表现及相关基因的表达，探讨这些基因在热性惊厥起病的儿童癫痫中的重要作用，进一步探寻热性惊厥起病的儿童中可能引起癫痫的致病基因，从而为热性惊厥起病的癫痫儿童提供诊断依据，指导治疗和预后。
研究方法收集2017年1月至2020年1月在山东省立医院小儿神经内科门诊及病房诊治的51例以热性惊厥起病的癫痫患儿的临床详细信息(性别、年龄、家族史、首次发作类型及年龄、再次发作间隔时间、发作次数、出生发育史等)，根据有无热性惊厥或癫痫家族史，分为家族史阳性组(28例)和家族史阴性组(23例)。在征得患儿父母同意及签署知情同意书后，进行患儿自身及其父母的外周血样采集，血量为2-4毫升，并放置于冰箱中，在4℃环境下实现冷藏保存。送基因公司应用高通量测序技术进行全外显子基因测序筛查，对发现的突变位点，通过采第一代稳定性测序法(Sanger)进行验证。
结果1.51例癫痫患儿中有7例发现阳性致病基因，发作形式中出现全面性强直阵挛发作30例，复杂性部分性发作10例，单纯性部分性发作6例，强直发作5例，眼睑肌阵挛发作4例，肌阵挛发作3例，失神发作2例，肌阵挛失神发作2例，行为终止发作2例，失张力发作1例，过度运动1例。发作形式同时存在2种以上的患儿有9例，其中6例患儿检测到阳性致病基因。
2.51例热性惊厥起病癫痫患儿中，有7例患儿共检测出8个与临床表型高度相关的基因变异位点，其中首次发作类型为单纯性热性惊厥者6例，复杂性热性惊厥者1例。8个与临床表型高度相关的基因变异位点中，有5个突变来源于母亲，3个突变为自发突变。有1例在同一基因上有2个突变位点，为CACNA1H(c.2061de1C, p.P689Qfs*4)、CACNA1H(c.5407C＞T，p.R1803C)2个位点突变，分别为移码突变和错义突变。1例为SCN1A(c.4252-4A＞G)，为剪切突变，该位点HGMD数据库已报道过，与Dravet综合征有关，ACMG指南判定为致病变异;1例为GABRB3(c.5G＞A，p.W2X)，为无义突变，该位点HGMD数据库已报道过，与癫痫性脑病、早发型有关，ACMG指南判定为疑似致病变异;1例为SCN1B(c.133C＞T，p.R45C)，为错义突变;1例为CHD2(c.4036G＞T，p.V1346L)，为错义突变;1例为SPTAN(c.3101A＞G，p.N1034S)，为错义突变;1例为SCN1B(c.491G＞C，p.R164T)，为错义突变。ACMG指南均判定为意义未明。
3.发现22例患儿共有26个可疑基因变异:ATP1A2、SCN9A、CACNA1H、TSC2、BSN、KCNT1、GRIN2A、HDAC4、KCNH5、DEPDC5、TSC2、KCNQ2、ALG13、ZEB2、RYR3、KCNMA1、ARHGEF9、FLNA、NID2、AARS、DEPDC5、TSCN9A、SCN2A、GABRD、HCN1、PRRT2，包括31个可疑基因变异位点，17个来自父亲，14个来自母亲，有4个位点TSC2(p.T1330M,c.3989C＞T)、TSCN9A(p.V1034I,c.3100G＞A)、SCN2A(p.M1128T，c.3383T＞C)、PRRT2(p.P216H，c.647C＞A)，文献数据库中有该位点报道，其中TSCN9A、PRRT2位于突变热点区域，但文献库中报道的相同位置的突变引起的氨基酸变化却不同。
4.患儿1有一个大样本数据支持易感位点ATP7A，既往研究报道与癫痫相关。
5.该研究中发现无意义突变88个。
6.有6例患儿未发现基因突变。
结论1.以热性惊厥起病癫痫患儿，发作形式多样，以全面性强直阵挛发作最常见，同时存在多种发作形式者，基因检测阳性率更高。
2.检测到SCN1A基因剪切突变(c.4252-4A＞G)、GABRB3基因无义突变(c.5G＞A，p.W2X)，进一步支持这两个基因位点与热性惊厥起病的癫痫的相关性。
3.检测到SCN1B基因错义突变(c.133C＞T，p.R45C)、(c.491G＞C，p.R164T)，CACNA1H基因移码突变(c.2061delC，p.P689Qfs*4)、错义突变(c.5407C＞T，p.R1803C)，CHD2基因错义突变(c.4036G＞T，p.V1346L)，这4个位点既往未报道过，对扩充热性惊厥起病癫痫患儿的基因谱具有一定的意义;
4.检测到基因SPTAN1、ATP7A，既往未报道过，可能与热性惊厥起病的癫痫有关，需更多临床数据证明;
5.受检者临床表型高度相关的8个基因变异位点均在家族史阴性组检出，可能与样本量少有关，有待于今后进一步研究。
研究目的总结分析热性惊厥起病的儿童癫痫临床表现及相关基因的表达，探讨这些基因在热性惊厥起病的儿童癫痫中的重要作用，进一步探寻热性惊厥起病的儿童中可能引起癫痫的致病基因，从而为热性惊厥起病的癫痫儿童提供诊断依据，指导治疗和预后。
研究方法收集2017年1月至2020年1月在山东省立医院小儿神经内科门诊及病房诊治的51例以热性惊厥起病的癫痫患儿的临床详细信息(性别、年龄、家族史、首次发作类型及年龄、再次发作间隔时间、发作次数、出生发育史等)，根据有无热性惊厥或癫痫家族史，分为家族史阳性组(28例)和家族史阴性组(23例)。在征得患儿父母同意及签署知情同意书后，进行患儿自身及其父母的外周血样采集，血量为2-4毫升，并放置于冰箱中，在4℃环境下实现冷藏保存。送基因公司应用高通量测序技术进行全外显子基因测序筛查，对发现的突变位点，通过采第一代稳定性测序法(Sanger)进行验证。
结果1.51例癫痫患儿中有7例发现阳性致病基因，发作形式中出现全面性强直阵挛发作30例，复杂性部分性发作10例，单纯性部分性发作6例，强直发作5例，眼睑肌阵挛发作4例，肌阵挛发作3例，失神发作2例，肌阵挛失神发作2例，行为终止发作2例，失张力发作1例，过度运动1例。发作形式同时存在2种以上的患儿有9例，其中6例患儿检测到阳性致病基因。
2.51例热性惊厥起病癫痫患儿中，有7例患儿共检测出8个与临床表型高度相关的基因变异位点，其中首次发作类型为单纯性热性惊厥者6例，复杂性热性惊厥者1例。8个与临床表型高度相关的基因变异位点中，有5个突变来源于母亲，3个突变为自发突变。有1例在同一基因上有2个突变位点，为CACNA1H(c.2061de1C, p.P689Qfs*4)、CACNA1H(c.5407C＞T，p.R1803C)2个位点突变，分别为移码突变和错义突变。1例为SCN1A(c.4252-4A＞G)，为剪切突变，该位点HGMD数据库已报道过，与Dravet综合征有关，ACMG指南判定为致病变异;1例为GABRB3(c.5G＞A，p.W2X)，为无义突变，该位点HGMD数据库已报道过，与癫痫性脑病、早发型有关，ACMG指南判定为疑似致病变异;1例为SCN1B(c.133C＞T，p.R45C)，为错义突变;1例为CHD2(c.4036G＞T，p.V1346L)，为错义突变;1例为SPTAN(c.3101A＞G，p.N1034S)，为错义突变;1例为SCN1B(c.491G＞C，p.R164T)，为错义突变。ACMG指南均判定为意义未明。
3.发现22例患儿共有26个可疑基因变异:ATP1A2、SCN9A、CACNA1H、TSC2、BSN、KCNT1、GRIN2A、HDAC4、KCNH5、DEPDC5、TSC2、KCNQ2、ALG13、ZEB2、RYR3、KCNMA1、ARHGEF9、FLNA、NID2、AARS、DEPDC5、TSCN9A、SCN2A、GABRD、HCN1、PRRT2，包括31个可疑基因变异位点，17个来自父亲，14个来自母亲，有4个位点TSC2(p.T1330M,c.3989C＞T)、TSCN9A(p.V1034I,c.3100G＞A)、SCN2A(p.M1128T，c.3383T＞C)、PRRT2(p.P216H，c.647C＞A)，文献数据库中有该位点报道，其中TSCN9A、PRRT2位于突变热点区域，但文献库中报道的相同位置的突变引起的氨基酸变化却不同。
4.患儿1有一个大样本数据支持易感位点ATP7A，既往研究报道与癫痫相关。
5.该研究中发现无意义突变88个。
6.有6例患儿未发现基因突变。
结论1.以热性惊厥起病癫痫患儿，发作形式多样，以全面性强直阵挛发作最常见，同时存在多种发作形式者，基因检测阳性率更高。
2.检测到SCN1A基因剪切突变(c.4252-4A＞G)、GABRB3基因无义突变(c.5G＞A，p.W2X)，进一步支持这两个基因位点与热性惊厥起病的癫痫的相关性。
3.检测到SCN1B基因错义突变(c.133C＞T，p.R45C)、(c.491G＞C，p.R164T)，CACNA1H基因移码突变(c.2061delC，p.P689Qfs*4)、错义突变(c.5407C＞T，p.R1803C)，CHD2基因错义突变(c.4036G＞T，p.V1346L)，这4个位点既往未报道过，对扩充热性惊厥起病癫痫患儿的基因谱具有一定的意义;
4.检测到基因SPTAN1、ATP7A，既往未报道过，可能与热性惊厥起病的癫痫有关，需更多临床数据证明;
5.受检者临床表型高度相关的8个基因变异位点均在家族史阴性组检出，可能与样本量少有关，有待于今后进一步研究。