山东地区梅毒螺旋体基因分型研究

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背景:梅毒(syphilis)是梅毒螺旋体(Treponema Pallidum,TP)感染引起的性传播疾病,可侵犯全身各器官(皮肤黏膜、心血管、神经、骨骼等),临床表现和转归差异很大,包括显性梅毒、隐性梅毒、晚期梅毒、自然痊愈、血清固定、治疗后复发等。20世纪90年代,TP Nichols菌株全基因组成功测序使得从基因分子生物学的角度研究梅毒成为可能,1998年Pillay等根据TP arp基因60bp重复序列数目分析、tpr基因MseI酶切后限制性片段长度多态性分析(RFLP)等,提出了TP[arp]/[tpr]两基因分型方法。2010年,Marra CM等在此基础上引入tp0548基因序列分析,提出了TP[arp]/[tpr]/[tp0548]三基因分型方法,进一步提高了TP基因分型能力。多个国家和地区对TP进行了基因分型的研究,亦有方法基因型与临床表型的相关性研究。迄今为止,山东地区未有TP基因型的研究,因此本研究收集临床TP DNA标本进行TP基因型的研究。目的:对山东地区TP临床标本的DNA予以分型,为梅毒病原体分子生物学研究提供依据。方法:1.收集疑似梅毒患者肛周及生殖器溃疡标本,提取TP DNA,经实时荧光定量PCR证实为TP DNA;2.进行arp、tpr、tp0548基因的扩增,对PCR扩增产物进行arp基因60bp重复序列数目分析、tpr基因Msel酶切后限制性片段长度多态性分析(RFLP)、tp0548基因序列分析。结果:1.本研究收集的67份TP DNA标本,48份确定了TP基因型。我们共发现arp基因6个亚型:5,10,12,14,15,18;tpr基因7个亚型b,d,e,i,j,k,p;tp0548基因亚型:f及c。山东地区TP菌株最常见的亚型是14d/f(39.6%,19/48),其次是14j/f(10.4%,5/48)、14b/f(8.3%,4/48)15d/f(6.3%,3/48)14k/f(4.2%,2/48)、15b/f(4.2%,2/48)和14i/f(4.2%,2/48);其他亚型各1例14p/f、15e/f、15i/f、15k/f、15p/f、18d/f、5d/f、14e/f、10d/f、12b/f。2.本研究发现了tp0548基因国内外尚未报道的新的亚型(CAGGCGGCAGTGGCCGCACGCGCTGGAGGGTCCGGCGGTAATGACAACCACCCCGGCAAGGAACAGTT TCTCCAGTT),命名为“k”亚型,鉴别了TP一个新的亚型15j/k。结论:山东地区TP存在菌群多样性,优势菌株基因型是14d/f。k亚型是tp0548基因新的亚型,15j/k是TP新的基因型。
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