多房棘球蚴病,亦称泡球蚴病（alveolar echinococcosis,AE）,是由多房棘球绦虫的中绦期幼虫-多房棘球蚴寄生所致,该虫体不仅在啮齿动物中也可在人的肺脏、肝脏等组织器官中寄生,引起的人兽共患病。多房棘球蚴感染的危害主要包括:机械性压迫,浸润性生长和组织毒性损伤,其病灶在肝脏组织最多且最典型。由于病程缓慢,潜伏期长和难以根除等多种因素,对该病的预防和控制仍有较大难度。RNA结合蛋白是一类具有RNA结合能力的蛋白质总称,其结构域能够特异性识别和结合不同类型的靶向RNA分子。核糖核酸结合蛋白（RBPs）伴随着RNA分子的合成,转运和分解及功能实现等生物过程,为确保生物体内RNA功能的发挥,具有不可忽视的作用。研究发现,RBPs不仅与RNA之间关系十分密切,而且在各个物种的生长发育,物质代谢和疾病发生的过程中同样占有这重要地位。虽然人们对多个物种RBPs的生物功能进行了广泛的了解和不断深入的研究,但是对多房棘球绦虫RBPs的研究仍然较少。本研究通过对多房棘球绦虫RNA结合蛋白28基因序列分析发现,RNA结合蛋白28是一种多房棘球绦虫所特有的RNA结合蛋白。因此,为了对多房棘球蚴RBP28的生物学特性和功能进行相关探索,以下为主要得研究内容与结果。1.多房棘球绦虫RBP28的基因生物信息学分析。从Worm Base基因数据库中查询得知多房棘球绦虫RBP28的ORF全长1245 bp,编码414个氨基酸。通过Basic local alignment search tool（BLAST）与不同的寄生虫中的RNA结合蛋白28基因序列进行对照分析。结果表明,近些年寄生虫在进化过程中RBP28却较为保守,可能在扁形动物出现之前就已存在,并且在进化过程中存在差异。多房棘球绦虫与细粒棘球绦虫的遗传距离为100,提示RBP28在棘球绦虫中进化保守。2.多房棘球绦虫RBP28蛋白原核表达和多克隆抗体制备。将RBP28基因使用RT-PCR的方法扩增,随后将产物与p ET-28a载体进行连接,并对双酶切结果进行鉴定。对构建成功的p ET-28a-RBP28质粒进行诱导表达。再以重组RBP28蛋白作为抗原,背部皮下多点注射免疫新西兰大白兔,当间接ELISA检测兔血清中的抗体效价达到1:102400时,收集兔血清,制备并纯化RBP28多克隆抗体,Western-bloting检测结果表明,制备的RBP28多克隆抗体能够特异性识别重组RBP28和多房棘球蚴全蛋白中天然RBP28蛋白。3.利用间接免疫荧光观察RBP28在虫体和细胞的分布特征。分离小鼠肝脏上的多房棘球蚴包囊,制备包囊切片,经脱蜡处理,使用3%双氧水进行抗原修复,利用0.25%的Triton X 100通化组织,FITC标记的山羊抗兔Ig G进行孵育。使用DAPI染色,随后使用中性树脂封片后,在免疫荧光显微镜下观察。结果发现RBP28主要分布于包囊的生发层。将分离的包囊用含有胰酶的PBS消化,置于6孔细胞培养板中进行贴壁培养,经0.25%Triton X-100处理。加入制备的RBP28多克隆抗体在4℃下孵育过夜。再加入Alexa Fluor 594标记的山羊抗家兔Ig G,并用DAPI染色液后封片。使用激光共聚焦显微镜观察并发现RBP28蛋白主要分布于多房棘球蚴虫体细胞细胞质中。4.免疫共沉淀及其复合物的银染与质谱鉴定。利用RBP28多克隆抗体与阴性血清分别对多房棘球蚴全蛋白进行免疫共沉淀。将免疫共沉淀复合物进行蛋白银染和质谱鉴定。通过银染与质谱鉴定,初步筛选出7种虫体蛋白,可能与RBP28存在互作关系。5.利用生物素标记技术探究RBP28与虫体总RNA的结合。对多房棘球蚴总RNA进行生物素标记。将标记好的RNA与RBP28在一定条件下孵育结合,PAGE电泳检测二者的结合能力。结果表明RPB28具备与RNA分子结合的能力。以上结果有助于更好的了解多房棘球绦虫RBP28的生物学特性与功能,也为探究多房棘球绦虫RBPs的作用机制积累了基础资料。