基于PI3K/Akt和APN/AMPK信号通路探讨黄芪葛根配伍对糖尿病大鼠骨骼肌糖脂代谢的影响

来源 :辽宁中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sdvfg4gf3fg3
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目的:通过本研究揭示黄芪、葛根及黄芪葛根配伍的水煎液均具有降糖降脂作用,阐明黄芪葛根配伍发挥的药效具有协同与拮抗的选择性,证实对糖尿病大鼠骨骼肌糖代谢和脂代谢具有调节作用,为临床有效治疗糖尿病提供实验依据。材料与方法:采用数据分层法将血糖值因素进行分层,依据类型随机抽样原则将86只健康的无特定病原体(SPF)级Sprague Dawley雄性大鼠分为6个组,即正常组(Normal组)11只、模型组(Model组)15只、阳性对照组(Positive control组)15只、黄芪组(Astragalus组)15只、葛根组(Pueraria组)15只、黄芪葛根配伍组(Astragalus and Pueraria组)15只。除Normal组外,其余5组大鼠均依据46mg·kg-1的剂量一次性给予2%的链脲佐菌素(STZ)溶液,通过腹腔注射将实验大鼠诱导成为糖尿病模型。Normal组和Model组均给予等量蒸馏水10 ml·kg-1,Positive control组、Astragalus组、Pueraria组和Astragalus and Pueraria组分别按照1.47、2.70、1.35和4.05 g·kg-1·d-1的剂量进行灌胃,6组的大鼠均给予30天的连续灌胃。检测大鼠血糖、血清总胆固醇(CHO)、血清甘油三酯(TG)的水平;应用酶联免疫吸附测定(ELISA)实验方法检测大鼠骨骼肌胰岛素(Ins)、胰岛素受体(InsR)、葡萄糖转运体-4(GLUT-4)、脂联素(APN)及脂联素受体(AdipoR)的含量;采用逆转录PCR(RT-PCR)技术检测大鼠骨骼肌胰岛素受体底物-2(IRS-2)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B-2(Akt2)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、GLUT-4、脂联素受体1(AdipoR1)、腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPKα)表达水平。本实验的数据应用Statistical Product and Service Solutions17.0的统计分析软件进行处理。结果1.对糖尿病大鼠血糖水平和血脂水平的检测与Normal组比较,Model组的血糖、血清总胆固醇、甘油三酯水平均明显升高,具有统计学差异(P<0.05)。与Model组比较,Astragalus组、Pueraria组、Astragalus and Pueraria组的血糖、血清总胆固醇及甘油三酯水平均明显降低,具有统计学差异(P<0.05)。在调节血糖和血清总胆固醇方面,黄芪葛根配伍没有交互效应,不具有统计学意义(P>0.05)。在调节血清甘油三酯方面,黄芪葛根配伍有交互效应,且两药合用优于单个药物的使用,具有统计学意义(P<0.05)。2.对糖尿病大鼠骨骼肌Ins、InsR、GLUT-4、APN、AdipoR含量的检测与Normal组比较,Model组的Ins、InsR、GLUT-4、APN、AdipoR含量均减低,具有统计学差异(P<0.05)。(1)对骨骼肌Ins含量的检测:与Model组比较,Astragalus组、Pueraria组的Ins含量都明显升高,具有统计学差异(P<0.05)。黄芪葛根配伍有交互效应,且两药合用不如单用黄芪,具有统计学意义(P<0.000)。(2)对骨骼肌InsR含量的检测:与Model组比较,Astragalus组、Pueraria组、Astragalus and Pueraria组的InsR含量均明显升高,具有统计学差异(P<0.05)。黄芪葛根配伍有交互效应,且两药合用不如单用黄芪,具有统计学意义(P<0.000)。(3)对骨骼肌GLUT-4含量的检测:与Model组比较,Astragalus组、Astragalus and Pueraria组的GLUT-4含量均明显提升,具有统计学差异(P<0.05)。黄芪葛根配伍没有交互效应,不具有统计学意义(P>0.05)。(4)对骨骼肌APN含量的检测:与Model组比较,Astragalus组、Pueraria组、Astragalus and Pueraria组的APN含量均明显增多,具有统计学差异(P<0.05)。黄芪葛根配伍有交互效应,且两药合用优于单一用药,具有统计学意义(P<0.000)。(5)对骨骼肌AdipoR含量的检测:与Model组比较,Astragalus组、Astragalus and Pueraria组的AdipoR含量均明显增多,具有统计学差异(P<0.05)。黄芪葛根配伍有交互效应,且两药合用优于单一用药,具有统计学意义(P<0.000)。3.对糖尿病大鼠骨骼肌IRS-2、PI3K、Akt2、GSK-3β、GLUT-4、AdipoR1、AMPKαmRNA表达的检测与Normal组比较,Model组的IRS-2、PI3K、Akt2、GLUT-4、AdipoR1、AMPKαmRNA表达均降低,GSK-3βmRNA表达增加,具有统计学差异(P<0.05)。(1)对骨骼肌IRS-2mRNA表达的检测:与Model组比较,Astragalus组、Astragalus and Pueraria组的IRS-2mRNA表达均明显升高,具有统计学差异(P<0.05)。黄芪葛根配伍未呈现出交互效应,不具有统计学意义(P>0.05)。(2)对骨骼肌PI3K mRNA表达的检测:与Model组比较,Astragalus组、Pueraria组、Astragalus and Pueraria组的PI3K mRNA表达均明显升高,具有统计学差异(P<0.05)。黄芪葛根配伍呈现出交互效应,且两药合用不如单用黄芪,具有统计学意义(P<0.05)。(3)对骨骼肌Akt2 mRNA表达的检测:与Model组比较,Astragalus组、Pueraria组、Astragalus and Pueraria组的Akt2 mRNA表达均明显升高,具有统计学差异(P<0.05)。黄芪葛根配伍未呈现出交互效应,不具有统计学意义(P>0.05)。(4)对骨骼肌GSK-3βmRNA表达的检测:与Model组比较,Astragalus组、Pueraria组、Astragalus and Pueraria组的GSK-3βmRNA表达均明显降低,具有统计学差异(P<0.05)。黄芪葛根配伍未呈现出交互效应,不具有统计学意义(P>0.05)。(5)对GLUT-4 mRNA表达的检测:与Model组比较,Astragalus组、Pueraria组、Astragalus and Pueraria组的GLUT-4 mRNA表达均明显升高,具有统计学差异(P<0.05)。黄芪葛根配伍未呈现出交互效应,不具有统计学意义(P>0.05)。(6)对AdipoR1 mRNA表达的检测:与Model组比较,Astragalus组、Pueraria组、Astragalus and Pueraria组的AdipoR1 mRNA表达均明显升高,具有统计学差异(P<0.05)。黄芪葛根配伍呈现出交互效应,且两药合用不如单一用药,具有统计学意义(P<0.05)。(7)对AMPKαmRNA表达的检测:与Model组比较,Astragalus组、Pueraria组、Astragalus and Pueraria组的AMPKαmRNA表达均明显升高,具有统计学差异(P<0.05)。黄芪葛根配伍未呈现出交互效应,不具有统计学意义(P>0.05)。结论1.黄芪、葛根及黄芪葛根配伍均具有降低糖尿病大鼠血糖血脂水平的作用。2.黄芪与葛根配伍在调节血糖和血清总胆固醇方面,未呈现交互效应;在调节血清甘油三酯方面,黄芪葛根配伍有交互效应,且两药合用优于单个药物的使用,由此显示配伍发挥的药效具有协同与拮抗的选择性。3.黄芪与葛根配伍在调节GLUT-4蛋白和IRS-2、Akt2、GSK-3β、GLUT-4、AMPK基因方面,未呈现交互效应;在调节Ins、InsR蛋白和PI3K基因方面,黄芪葛根配伍有交互效应,但合用不如单用黄芪,而优于葛根;在调节AdipoR1基因方面,黄芪葛根配伍有交互效应,但合用不如单个药物的使用;在调节APN、AdipoR蛋白方面,黄芪葛根配伍有交互效应,且两药合用优于单个药物的使用。由此显示配伍调节糖脂代谢的效应机制可能与PI3K/Akt和APN/AMPK信号转导通路上的关键因子的表达变化相关,且配伍发挥的药效具有协同与拮抗的选择性。
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