论文部分内容阅读
目的:探讨糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)VCAM-1的表达和对HUVECs与人单核细胞(PBMCs)粘附率的影响,观察蛋白激酶C(PKC)抑制剂(STS)及丝裂酶原激活的蛋白激酶(MAPK)抑制剂(PD98059)对上述效应的干预作用,并研究HUVECs受AGEs刺激后,其PKC活性的变化,从而探讨AGEs对人血管内皮细胞粘附功能的影响及其可能的机制.方法:以D-葡萄糖和牛血清白蛋白(BSA)在体外37℃条件下孵育制备AGEs.用胶原酶消化法分离HUVECs并加以培养、传代.以AGEs、AGEs加STS和AGEs加PD98059干预HUVECs,采用流式细胞术(FCM)测定HUVECs表面VCAM-1的表达水平.用密度梯度加粘附法分离人外周血单核细胞(PBMCs),按Espositos法进行HUVECs-PBMCs粘附试验,并根据Chen氏法计算HUVECs-PBMCs的粘附率.采用同位素[γ-32P]ATP液闪计数技术测定受AGEs干预后HUVECs PKC活性的变化.结果:在基础状态下,HUVECs有一定量的VCAM-1表达.VCAM-1的表达水平随AGEs浓度的增大,逐渐升高(P<0.01).在时-效关系上,AGEs与HUVECs孵育3h后,VCAM-1表达开始升高(P0.05),6h达到高峰(P<0.01),后逐渐下降,24h回至基础水平.HUVECs-PBMCs粘附率的变化与VCAM-1的表达水平呈高度平行关系.蛋白激酶C(PKC)抑制剂(STS)可明显降低由AGEs所导致的VCAM-1表达增加以及HUVECs-PBMCs粘附率的增加(P<0.01).丝裂酶原激活的蛋白激酶(MAPK)抑制剂(PD98059)对上述效应无明显影响.AGEs与HUVECs孵育10min后,PKC活性明显升高(P<0.01),15 min达到高峰(P<0.001),20min后逐渐下降,60min回至基础水平.PKC的活性随AGEs浓度的增大而升高(P<0.05~0.01).结论:AGEs可增加HUVECs VCAM-1的表达和HUVECs-PBMCs的粘附率.PKC抑制剂(STS)能明显抑制AGEs的上述作用,但不能完全逆转.AGEs可使HUVECs的PKC活性增强.以上结果提示:AGEs使人血管内皮细胞VCAM-1表达增加和粘附功能增强系部分通过增加细胞内PKC的活性来实现.