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【目的】将从Wistar大鼠分离纯化得到的雪旺细胞进行体外培养,并联合根据Ficoll法分离得到的人脐血单个核细胞共移植治疗脊髓损伤,探讨联合移植两种细胞在治疗脊髓损伤中的作用,评价该方法的疗效。【方法】手术取大鼠双侧隐神经,采用双酶消化组织块法结合机械分离法分离培养雪旺细胞;应用反复组织块培养法和差速贴壁法纯化雪旺细胞,观察其生长规律并鉴定。利用MASCIS(Multicenter Animal Spinal Cord Injury Study)Impactor ModelⅡ脊髓打击器制成4组共40例Wistar大鼠T10脊髓损伤模型,每组10例:DMEM实验对照组,人脐血单个核细胞(Human Cord BloodMononuclear Cells,HCMNCs)移植组,大鼠雪旺细胞(Schwann Cells,SCs)移植组,HCMNCs与SCs联合移植组。大鼠脊髓损伤造模术后1周,分别将DMEM、培养的SCs、以及根据Ficoll法分离得到的HCMNCs分别按实验分组进行移植。术后3天开始至术后12周每周用BBB评分标准评价后肢恢复情况;术后12周,根据脚印分析实验,计算肢体旋转角度和肢体间协调性;术后12周后每组随机选择3只动物进行10%BDA顺行神经示踪标记,标记2周后处死动物,取出动物损伤段脊髓作5μm快速冰冻切片后,分别进行BDA显影荧光,免疫组化及HE染色。其中,4组实验大鼠BBB评分采用重复测量资料的方差分析,比较不同时点指标的变化趋势;免疫组化染色的数字图像经Image pro plus 5.0显微图像分析软件处理,以综合评估脊髓功能恢复程度。【结果】SCs经分离纯化后在体外稳定传4代,于镜下观察细胞清亮,呈两端尖、中间膨大的长梭形,生长状态良好,经S-100染色后呈绿色的双极或多极梭形形态,胞核较亮,突起较暗。HCMNCs联合SCs共移植治疗脊髓损伤的实验中,脊髓损伤后3周内,各组功能改善的差异没有统计学意义;4周以后各组之间的差异具有统计学意义(p＜0.01),其中联合移植组的实验动物BBB功能评分最高,单纯SCs移植或HCMNCs移植的评分虽然高于空白对照组,但都低于联合移植组。脚印分析实验中,肢体间协调性和肢体旋转角度各组之间的差异有统计学意义(p＜0.01),联合移植组改善亦显著优于其余3组。组织学观察的结果均与功能学检查的结果相吻合。HE和BDA染色发现联合移植组损伤处空洞面积明显小于其他组,且通过空洞的皮质脊髓束纤维染色较多。NF-200免疫组化染色显示联合移植组免疫染色较对照组面积为大,且着色较深,累积光密度(IOD)明显高于对照组及单纯HCMNCs移植组和SCs移植组,差异有统计学意义(P＜0.01)。【结论】SCs可以分泌多种神经营养因子,并使脊髓损伤区域受损轴突再髓鞘化,从而促进脊髓损伤后的轴突再生和功能恢复;HCMNCs在脊髓损伤区域可以向神经元和星形胶质细胞、少突胶质细胞分化,填充组织缺损,弥补脊髓空洞,有利于神经再生轴突的延伸和突触之间的连接。两者联合移植治疗脊髓损伤后,利用SCs的优势促进更多比例的HCMNCs向神经元方向分化,填充脊髓空洞,促进轴突再生,显著改善脊髓损伤后的功能恢复。