【摘 要】
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本试验利用候选基因寻找法结合现代基因分型技术,旨在探索延边黄牛成纤维细胞生长因子14（FGF14）、解耦联蛋白2（UCP2）、解耦联蛋白3（UCP3）、肌球蛋白重链3（MYH3）、肌球蛋白重链8（MYH8）基因多态性及其对生长性状的影响,以期为延边黄牛品种选育及种质资源保护提供科学依据。以120头24月龄延边黄牛为研究对象,应用DNA混池测序和高分辨率熔解曲线（HRM）分型检测,探究这5个候选基因
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本试验利用候选基因寻找法结合现代基因分型技术,旨在探索延边黄牛成纤维细胞生长因子14（FGF14）、解耦联蛋白2（UCP2）、解耦联蛋白3（UCP3）、肌球蛋白重链3（MYH3）、肌球蛋白重链8（MYH8）基因多态性及其对生长性状的影响,以期为延边黄牛品种选育及种质资源保护提供科学依据。以120头24月龄延边黄牛为研究对象,应用DNA混池测序和高分辨率熔解曲线（HRM）分型检测,探究这5个候选基因不同基因型对延边黄牛生长性状是否存在关联性并进行遗传统计学分析。结果显示:延边黄牛5个候选基因所检测位点均存在1处突变,FGF14基因第3外显子631947位点存在A>G突变且AG基因型与体高、体重、十字部高和尻长性状存在显著相关（P<0.05）;UCP2基因第4外显子53412568位点存在C>G突变且CG基因型在背高性状存在显著相关（P<0.05）,CC基因型在体重和腹围性状存在显著相关（P<0.05）。UCP3基因第5外显子53443536位点存在C>T突变且CC基因型对胸围性状存在显著相关（0.05）,MYH3基因第41外显子29602748位点存在T>G突变且GG基因型十字部高和腰角宽性状存在显著相关（P<0.05）,MYH8基因第36外显子29406042位点存在C>T突变且TT基因型和CT基因型在体重性状存在显著相关（P<0.05）,同时TT基因型在胸围性状存在显著相关（P<0.05）。UCP2为解耦联蛋白家族成员之一,是参与机体能量平衡并以脂肪酸形式调节脂代谢的关键基因之一,本试验将其作为探索延边黄牛分子遗传标记的候选基因的同时探索UCP2基因在延边黄牛脂肪细胞分化过程中的功能。首先对传代培养的延边黄牛前体脂肪细胞进行诱导分化并鉴定,检测UCP2的表达情况;其次结合分子技术构建UCP2基因的si RNA干扰和过表达载体并转染进脂肪细胞,利用油红O染色、甘油三酯测定、RT-q PCR、CCK-8、流式细胞仪检测等方法探索UCP2基因在延边黄牛前体脂肪细胞生长发育中的影响。结果显示:延边黄牛前体脂肪细胞形态学观察显示细胞呈长梭形,向着成纤维状生长的形态,油红O染色显示可观察到被染成橘红色的脂滴汇聚成戒指状,成脂相关基因PPARγ、C/EBPα、LPL和FASN表达规律显示成功建立延边黄牛前体脂肪细胞诱导分化模型,甘油三酯含量呈逐渐上升趋势,UCP2基因的表达呈先升高后降低的趋势,且在第4天表达量达最高;UCP2过表达组中UCP2的表达极显著高于对照组（P<0.001）,成脂相关基因PPARγ、C/EBPα、LPL和FASN的表达均升高,对脂质积累与甘油三酯含量起着积极的作用;UCP2干扰组可极显著提高增殖标志基因PCNA和Cyclin D1的表达（P<0.001）,显著提高细胞的增殖活力（P<0.05）;UCP2过表达组可极显著提高促凋亡基因BAX的表达（P<0.001）,极显著抑制抑凋亡基因BCL2的表达（P<0.01）,同样凋亡检测结果显示UCP2过表达组可显著促进细胞凋亡（P<0.05）。最后,对JNK信号通路中关键基因的表达检测发现,UCP2过表达组中JNK1和JNK2的表达水平均在第4天表现极显著升高（P<0.001）,后无显著影响（P>0.05）。综上所述,本研究选择的5个候选基因对延边黄牛生长发育均有一定的影响,探究UCP2基因对延边黄牛脂肪细胞分化过程中脂代谢的影响,为UCP2基因的功能及肉质基因筛选工作提供基础参考材料。
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