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乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase，AChE，EC3.1.1.7．)是昆虫神经传导中的一种关键酶，在胆碱能神经突触间，通过催化神经递质乙酰胆碱来维持神经冲动的正常传递。AChE是有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的作用靶标。Tao等(2006)经克隆测序对比，在残杀威抗性品系家蝇中发现了4个突变频率很高的突变V261L、G343A、F408Y和D422V，其中D422V是一个新的突变。为了确定这4个氨基酸突变与抗性之间的关系，我们运用了定向突变技术构建了16组ace，并在Bac-to-Bac杆状病毒高效表达系统中进行高效稳定的表达和纯化，对纯化的AChE蛋白进行酶学特性及其对不同有机磷和氨基甲酸酯的杀虫剂的动力学参数进行了分析，通过对变构的AChE与抗性的关系，来了解昆虫AChE基因突变与昆虫产生抗性机理之间的相关性。本论文主要研究如下：1．通过定点突变技术，成功构建了关于4个点突变V261L、G343A、F408Y和D422V的16组ace。2．分别将16组ace与pFastBacTM1载体相连构建真核表达载体，重组于Bacmid，PCR成功鉴定了重组Bacmid为4300bp的片段。将16组重组Bacmid，利用Bac—to—Bac系统，在昆虫细胞Tn-5B1-4中进行表达，SDS—PAGE出现的一条66KDa左右的特异性条带为我们的目的蛋白。大批量的表达B(G343A)、AB(V261L/G343A)、BD(G343A/D422V)、CD(F408Y/D422V)4组突变体蛋白，并进行Western blotting分析出现了印迹，进一步证实了表达了AChE蛋白。3．对4组突变蛋白以及敏感SS纯化后的蛋白进行功能研究的分析，研究表明突变体AChEs的最适反应温度、pH值等一些生化特性发生了改变，通过离体酶动力学实验对米氏常数Km，最大反映速率Vmax，双分子速率常数岛，抑制剂化合物对AChE活性部位的亲和力常数Ka，磷酸化或氨基甲酸化速率常数κ2等几个重要参数的研究，分析了4种突变体蛋白AChE在动力学上发生的变化，以及对不同突变体AChE蛋白热稳定性的测定及抑制中浓度I50的测定，测定结果研究表明了4组突变体蛋白对每种抑制剂都产生了不同程度的抗药性，敏感度明显降低，表明了敏感度的降低与突变有着及其密切的关系。