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目的:慢性髓细胞白血病(Chronic myeloid leukemia,CML)是Bcr/Abl融合基因导致的造血干细胞恶性克隆性疾病,针对异常激活的Bcr/Abl酪氨酸激酶的抑制剂(Tyrosine kinase inhibitors,TKI)目前作为CML的一线用药在CML治疗中取得了极大成功。但是慢性期微小残留疾病(Minimal residual disease,MRD)的持续存在,使得CML病人在停药后近30%复发;部分病人出现耐药且急变期TKI疗效差,成为TKI治疗的瓶颈。最新进展提示c-Myc激活在调控CML白血病干细胞(Leukemia stem cells,LSCs)中至关重要,但其机制不清。本实验以CML急变期及慢性期患者骨髓单个核细胞、人慢性髓细胞白血病急变细胞系K562为研究对象,观察MDM2、c-Myc及mi R-29三者在CML急变期及慢性期患者骨髓单个核细胞中的表达情况,分析其与临床特征的关系;在CML急变细胞系K562中初步证实了c-Myc激活受癌基因MDM2转录后调控,并抑制下游肿瘤抑制基因mi R-29的转录;同时也进一步探究了转录后激活c-Myc对CML急变细胞系K562的增殖、凋亡、细胞周期及甲磺酸伊马替尼(Imatinib mesylate,IM)药物敏感性所产生的影响。方法:Ficoll密度梯度离心法分离CML急变期及慢性期患者骨髓单个核细胞,按常规方法冻存,并记录其临床资料;RPMI1640培养基常规培养CML急变细胞系K562,Western Blot检测上述细胞中MDM2、c-Myc蛋白的表达并分析两者表达的相关性;Real-time RT-PCR检测上述细胞中MDM2、c-Myc m RNA及mi R-29三者的表达情况并分析其相关性;脂质体转染法转染MDM2表达质粒及MDM2sh RNA质粒、慢病毒转染法转染c-Myc sh RNA,Western Blot检测转染后的K562细胞系中MDM2、c-Myc蛋白的表达并分析两者表达的相关性;Real-time RT-PCR检测上述细胞系中MDM2、c-Myc及mi R-29三者的表达情况并分析其相关性;MTT法检测脂质体转染MDM2 sh RNA质粒48h后K562细胞系的增殖及转染前后K562细胞系的IM敏感性;流式细胞术检测脂质体转染MDM2 shRNA质粒48h后K562细胞系的凋亡及细胞周期的变化。结果:1、在CML急变期患者的骨髓单个核细胞及CML急变细胞系K562中MDM2、c-Myc的m RNA及蛋白高表达,在CML慢性期患者中相对低表达,且两者的表达有一定的正相关性;mi R-29在CML急变期患者的骨髓单个核细胞及K562细胞系中低表达,在CML慢性期患者中相对高表达,且与MDM2及c-Myc的表达存在一定的负相关性;2、脂质体转染MDM2表达质粒后的K562细胞系与转染对照载体相比,MDM2蛋白及m RNA表达明显升高,c-Myc蛋白表达明显升高,m RNA基本不变,mi R-29表达明显下降;3、脂质体转染MDM2 sh RNA质粒后的K562细胞系与转染对照载体相比,MDM2蛋白及m RNA表达明显下调,c-Myc蛋白表达明显下调,m RNA基本不变,mi R-29表达明显升高;4、慢病毒转染c-Myc sh RNA后的K562细胞系与转染对照载体相比,c-Myc蛋白及m RNA表达明显下调,MDM2蛋白及m RNA表达稍有下调,mi R-29表达明显升高;5、MTT及流式细胞检测结果显示,脂质体转染MDM2sh RNA质粒后的K562细胞与转染对照组相比,细胞增殖受到明显抑制,IM药物敏感性也有所提高,细胞凋亡率升高,但细胞周期没有明显变化。结论:癌基因MDM2可调控c-Myc蛋白表达,但对其m RNA表达无影响,提示MDM2可能在转录后水平对c-Myc基因进行调控,进而c-Myc作为转录因子抑制肿瘤抑制因子mi R-29的转录;干扰MDM2的表达可在一定程度上抑制CML急变细胞系K562的增殖,增加其对IM的敏感性,促进K562细胞的凋亡,但对细胞周期没有明显的影响,其机制可能通过转录后激活c-Myc,从而调控肿瘤抑制因子mi R-29的表达。