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本文选取广东省从化市红柿柿叶为原料,测定柿叶中总黄酮含量,探讨柿叶总黄酮的提取和纯化工艺条件,通过紫外吸收光谱等初步鉴定柿叶中的黄酮类化合物,并研究了柿叶提取物的体外抗氧化能力和柿叶黄酮提取液的稳定性。主要内容和研究结果如下:
1、对柿叶总黄酮含量进行了测定,得每克干柿叶中总黄酮含量为23.99mg。
2、研究乙醇回流浸提法和超声波辅助提取法提取柿叶总黄酮的最佳工艺条件,并对二者进行比较。
(1)选择乙醇浓度、乙醇用量、提取温度和提取时间四因素进行正交实验,得到乙醇回流浸提法的最佳提取条件:以1:30(w:v)的料液比加入50%乙醇,在70℃的温度下提取4.5h,总黄酮提取量为21.40mg/g。
(2)采用二次响应面法,确定了超声波辅助提取法提取柿叶总黄酮的最佳提取条件:以1:30(w:v)的料液比加入52%乙醇,在67℃的温度下,调节超声波功率为60W,提取48min,经验证实验得到总黄酮提取量为23.04mg/g。
(3)两种提取方法相比,超声波辅助提取法比乙醇回流浸提法更具时间优势。电镜观察超声波作用前后柿叶粉末颗粒的结构变化,发现经过超声波作用的柿叶粉末有明显的"破坏"痕迹,可提高有效物质的溶出。
3、对柿叶总黄酮的纯化工艺进行了研究,得到优化工艺条件为:采用大孔吸附树脂AB-8,选用径高比为1:30的层析柱,调节样液pH值为6,以2ml/min的吸附流速进行动态吸附;用10BV 50%乙醇,以1mL/min的解吸流速进行动态解吸。当柿叶干粉量与AB-8树脂体积比例为1.7g:1mL(W:V)时,树脂可充分吸附其中的黄酮。大孔吸附树脂纯化法的黄酮解吸率(得率)、样品纯度及黄酮纯度均高于乙酸乙酯萃取法。
4、利用紫外吸收光谱扫描柿叶提取物中可能含有黄酮类和黄酮醇类化合物;利用高效液相色谱-质谱联用定性鉴定柿叶提取物中可能含有甙元槲皮素和芦丁;利用红外吸收光谱初步鉴定化合物含有=C—OH、C—H、C—O、苯环结构。
5、研究了柿叶提取物的体外抗氧化能力和柿叶黄酮提取液的稳定性。柿叶提取物对二苯代苦味肼基自由基DPPH在较低浓度时就有很好的抑制作用,而对羟自由基OH和过氧化氢H<,2>O<,2>的清除作用在较高浓度时较好。不同季节柿叶提取物与同浓度的Vc相比,对DPPH的抑制率相差不大;对·OH的清除率Vc高于柿叶提取物;而对H<,2>O<,2>的清除率柿叶提取物高于Vc。柿叶黄酮提取液有耐光性,热稳定性较好;耐酸,但在碱性条件下不稳定;葡萄糖和蔗糖对稳定性有一定影响;食盐和柠檬酸在高浓度时会影响其稳定性;苯甲酸钠对稳定性不造成影响;提取液对Zn<2+>稳定,对Fe<2+>不稳定,对低浓度的Mg<2+>、Ca<2+>较稳定,高浓度时不稳定。